第05章-临床血液常规检测仪器知识扩充.doc
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1、 首页 第五章 临床血液常规检验仪器血液在维持人体正常生理活动中有重要功能,被称为“生命之河。机体生理和病理的变化,必将会引起血液组分如血细胞、凝血因子等的改变。与时发现这些变化,可作为临床医师诊断、治疗、疗效判断、预后估计的重要依据。临床血液常规检验仪器就是了解这些变化最常用的分析仪器,它包括血细胞分析仪、自动血液凝固分析仪,是血液分析技术中的根本仪器,也是临床实验室的常用仪器,更是根底医学和临床医学研究的重要工具之一。近五十年来,随着科学技术的日新月异,这些仪器得到了长足的进步,促进了临床实验室标准化、规化、自动化开展,丰富了临床检验容,提高了检验质量和检验水平,为临床研究疾病的发生、开展
2、与分类,诊断与鉴别诊断,疗效监测与预后估计等提供了新的思路和新的手段与新的标准,大大丰富了临床血液学的检验容,促进了血液学的开展。一、血细胞分析仪概述血细胞分析仪(blood cell analyzer,BCA)是指对一定体积全血血细胞异质性进展自动分析的常规检验仪器。它又称血细胞自动计数仪(automated blood cell counter,ABCC)、血液学自动分析仪(automated hematology analyzer,AHA)。但ABCC应当代表的是早期的低档次的BCA,而AHA外延过大,故多数学者称之BCA。20世纪40年代末,美国库尔特(W.H.Coulter)先生发明
3、了电阻抗法微粒子技术计数专利,并于1953年开发研制了世界上第一台BCA(Coulter Model A型)运用于临床检验中。当时这种仪器为一个检测通道,仅能进展红细胞、白细胞计数,故称ABCC。20世纪60年代,在原来的根底上增加了血红蛋白、红细胞平均体积、平均血红蛋白含量、平均血红蛋白浓度和红细胞比容等测定参数。20世纪70年代专用的血小板计数仪问世,但它是将抗凝全血低速离心,别离富含血小板血浆进展计数。不久,随着计算机技术的应用, 血小板和红细胞可在一个通道一起同时计数,至此,BCA已能作全血细胞计数(Complete blood cell count,CBC)。80年代,双检测通道,多
4、参数BCA相继研制成功,增加了红细胞体积分布宽度、血小板比容与平均体积、白细胞分类计数等参数;白细胞分类两分群、三分群、五分群BCA先后投入临床应用。自20世纪90年代以来,多功能、多参数BCA不断产生,BCA由阻抗型的18参数,开展至今天的46个参数之多,诞生了许多非传统新参数,概括为以下几个方面:新的白细胞参数:淋巴细胞CD4与CD8计数、平均过氧化物酶活性指数mean peroxidase index,MPXI、异常白细胞数量和百分比等。新的红细胞参数:红细胞血红蛋白含量分布宽度HDW、红细胞血红蛋白含量CH、红细胞平均血红蛋白含量CHCM等。新的网织红细胞参数:网织红细胞百分比Reti
5、c%、网织红细胞计数Retic#、低荧光强度网织红细胞百分比LFR%、中等荧光强度网织红细胞百分比MFR%、高荧光强度网织红细胞百分比HFR%、网织红细胞血红蛋白含量CHr、平均网织红细胞体积MCVr、网织红细胞血红蛋白含量分布宽度HDWr、网织红细胞平均血红蛋白浓度CHCMr、网织红细胞分布宽度RDWr、未成熟网织红细胞指数IFR、网织红细胞成熟指数RMI等。新的血小板参数:血小板平均浓度MPC、血小板平均质量MPM等。其他参数:造血干细胞、幼稚细胞有核红细胞检测计数功能等。二、血细胞分析仪的校准 BCA是临床实验室最常用的分析仪器之一,在仪器精细度良好的前提下,正确校准仪器是保证临床检测结
6、果准确的关键。为此结合国实际情况,全国血液学、体液学委员会就BCA校准问题提出如下建议。一校准的一般要求1.为了保证检测结果的准确性,要求对每一台BCA进展校准。仪器安装时必须由厂家进展校准并提供记录,否那么不能用于临床标本的检测。2.实验室须按“建议的要求建立适合本实验室使用的BCA校准程序并写成文件。容包括:使用校准物的溯源性、来源、名称与其保存方法;校准的具体方法和步骤;何时要求进展校准、由何人负责实施等。3.BCA进展校准后,必须开展室质量控制以监测仪器的检测结果是否发生漂移。二校准物1.校准物的来源一是仪器的配套校准物;二是来自新鲜人血,但定值要求直接或间接地溯源至国际标准。 2.校
7、准物的选择使用中国药品监视管理局注册登记、国际公认质量可靠的检测系统的实验室,应选用制造商规定的配套校准物。使用新鲜血作为校准物但必须强调其溯源性。对于使用无配套校准物检测系统的实验室,必须使用新鲜血进展仪器校准。3. 质控物和校准物的区别从理论上讲概念不同;从性质上讲,校准物的特性更接近新鲜血;从定值准确性来看,两者有差异,但不显著;从作用上看,质控物用于常规工作中,随被测样本一起测定,校准物只有在仪器条件发生变化而需要校准时才使用;从使用上看,校准物必须配套,且配套厂家的校准物,校准同一系列、不同型号仪器所用的靶值相近,但不一定完全一样,质控物一般通用,且不同型号BCA间差异较大,在使用时
8、务必注意。三校准方法对使用中国药品监视管理局注册登记的国际公认质量可靠的检测系统的实验室,在使用制造商规定的配套校准物时,严格按仪器说明书规定的程序进展校准。使用其他检测系统的实验室,可用新鲜血按如下方法进展仪器校准。1.仪器的准备 先用清洗剂对仪器部各通道与测试室处理30min。确认仪器的背景计数、精细度与携带污染率在说明书规定的围时,方可进展校准,否那么须查找原因,必要时请维修人员进展检修。2.校准物的准备1使用制造商提供的配套校准物时 :将校准物从冰箱28取出后,要求在室温1825条件下放置15min,使其温度恢复至室温。观察校准物是否超出效期,是否有变质或污染。轻轻地将校准物反复颠倒混
9、匀,并置于两手间慢慢搓动,使其充分混匀。打开瓶塞时,应垫上纱布或软纸,使溅出的血液被吸收。将两瓶校准物合在一起,混匀后再分装于2个瓶。2使用新鲜血作为校准物时 :用EDTA-K2抗凝剂的真空采血管取健康人新鲜血10ml,每ml血抗凝剂的浓度为1.52.2mg。要求新鲜血白细胞、血红蛋白、红细胞、红细胞比容、血小板检测结果在正常参考围。将新鲜血混匀后分装于洁净、无菌、带塞的3个试管或5ml大小的试剂瓶,每管的血量约为3ml。取其中一管,用二级标准检测系统或规操作的检测系统连续检测11次,计算第211次检测结果的均值,以此均值为新鲜血的定值。其他2管新鲜血作为定值的校准物,用于仪器的校准。 3.对
10、校准物检测取1管校准物,连续检测11次,第一次检测结果不用,以防止携带污染。仪器假设无自动校准功能,那么将第211次的各项检测结果,记录在工作表格中,计算出均值,均值的小数点后数字保存位数,较日常报告结果多一位。有自动校准功能的仪器可直接得出均值。4.仪器的判别 将上述均值与校准物的定值比拟以判别是否需要调整仪器:计算各参数的均值与定值相对误差的百分数不计正负号,计算公式:相对误差均值定值定值100与表中的判别标准进展比拟。各参数均值与定值的差异全部等于或小于表中的第一列数值时,仪器不需进展调整,记录检测数据即可;假设各参数均值与定值的差异大于表中的第二列数值时,需请维修人员核查原因并进展处理
11、;假设各参数均值与定值的差异在表中第一列与第二列数值之间时,需对仪器进展调整,调整方法按说明书的要求进展。假设仪器无自动校准功能,那么将定值除以所测均值,求出校准系数,将仪器原来的系数乘以校准系数即为校准后的系数,将校准后的系数输入仪器更换原来的系数。表 仪器校准的判别标准校准项目相 对 偏 差% 第一列 第二列WBC1.510RBC1.010Hb1.010HCT2.010MCV1.010PLT3.015MPV5.0205.校准结果的验证 仪器校准的判别标准:将第二管未用的校准物充分混匀,在仪器上重复检测11次,去除第一次结果,计算第211次检测结果的均值,再次与表中的数值对照。假设各参数的差
12、异全部等于或小于第一列数值,证明校准合格。如达不到要求,须请专业维修人员进展检修。四需对仪器进展校准的情况1.BCA在投入使用前。2.更换部件进 行维修后,可能对检测结果的准确性有影响时。3.在排除仪器故障和试剂的影响因素后,室质量控制显示仪器的检测结果有漂移时。4.长时间停用再开始启用时。5.对于开展常规检验的实验室,要求至少半年进展一次校准。五其他有关设备的校准所有对BCA检测结果的准确性有影响的实验设备,在投入使用后都要定期进展校准。如稀释器、天平、温度计、湿度计等。六仪器校准的考前须知1.BCA测定新鲜血重复性良好,是进展仪器校准的先决条件。2.贮血用的试管或试剂瓶必须硅化或使用塑料制
13、品。3.校准BCA最好用有溯源性、准确定值的新鲜血。对无配套校准物的仪器更应该如此。4.国际公认质量较好的BCA生产厂家提供的质控制物如人工胶乳微粒有一个相对可靠的定值围。用此校准配套仪器后,测定新鲜血的结果有一定差异,但偏差在可承受围。 5.用Coulter 4C质控物或国产的所谓定值质控物仅一个靶值,用于各种仪器校准不同厂家、不同系列、不同型号BCA的方法是不正确的。6.用非配套的校准物或质控物校准仪器后,使新鲜血测定偏差显著增大,有研究说明,尤以白细胞、血小板、红细胞比容表现最为明显。这主要是由于不同仪器的测定原理与校准物的特性不匹配所造成的。三、血细胞分析仪的进展随着电子技术、流式细胞
14、技术、激光技术、电子计算机和新荧光化学物质等多种高新技术在临床检验工作中的应用,BCA的自动化程度、功能和设计都大幅度提高。这些提高主要表现在以下方面:一仪器测试原理不断创新1.白细胞分类的改良:即由电阻抗法按白细胞体积的“两分群、“三分群开展到集多种物理化学方法处理白细胞、用先进的计算机技术区分、区分经上述方法处理后的各细胞间的细微差异,综合分析试验数据,得出较为准确的白细胞分类结果。迄今为止主要有前述的四种类型。2.红细胞和血小板计数原理的改良 二维激光散射法测定红细胞:克制了电阻抗法在病理情况下测定的MCH、MCHC结果不准的问题。测定时,先使自然状态下双凹盘状扁平圆形的红细胞成球形,并
15、经戊二醛固定,其目的是使红细胞无论以何种方式通过测试区时,所得散射光强度都一样,该处理并不影响红细胞平均体积检测。仪器根据低角度23测量单个红细胞体积与总数;高角度56光散射强度反映单个红细胞血红蛋白的浓度,经计算机处理,准确得出MCV、MCH、MCHC测定值,绘出红细胞散射图、单个红细胞体积与红细胞血红蛋白的含量的直方图,并换算出RDW和HDW等参数。二维激光散射法测定血小板:同上述红细胞测定一样,球形化的血小板一个个通过检测区时,测定两个角度的激光散射强度,低角度测定其的大小和数量,高角度测定血小板的密度。尽管小红细胞、红细胞碎片、红细胞残骸ghost等与大血小板的体积相似,但因容物不同,
16、在血小板二维散射图上可区别并分别计数。由此,该法克制了电阻抗法计数血小板易受多种因素影响,不能准确计数大血小板,使病理情况下血小板计数准确性较差的缺点。二新血细胞分析参数的出现自20世纪90年代以来,多功能、多参数的BCA不断产生,由电阻抗型的18参数,开展至今天的46个参数之多,产生了许多非传统新参数,为临床研究疾病的发生、开展与分类,诊断与鉴别诊断,疗效监测与预后估计等提供了新的思路和新的手段与新的标准,大大丰富了临床血液学的检验容,促进了血液学的开展。三各种特殊技术的应用为了保证检测结果的准确性,各BCA生产厂家自采用了不同的先进技术:运用双鞘流技术、柔变轮廓分类技术、智能微数技术、核酸
17、荧光染色技术,提高细胞计数和分类准确性与对网织红细胞、异常细胞的识别能力:运用鞘流sheath fluid技术、扫流技术、隔板技术、浮动界标和拟合曲线技术等,保证血小板计数的准确性; 仪器自动保护技术:采用反冲或瞬间燃烧电路排堵技术,管道和进样针自动清洗与故障自检功能;密封双旋转阀“截取血样技术,以防止单阀有磨损时造成稀释后的巨大误差;双通道进样、双定标程序的使用:为防止末梢血与静脉血因其间的固有差异在使用同一通道与同一定标程序校正仪器时引起的计数误差,分别采用末梢血计数通道、静脉血计数通道,并特地设置两套定标程序,即分别对静脉血和末梢血结果进展校正,从而有效保证末梢血与静脉血结果的一致性;仪
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