茚三酮显色法测定氨基酸含量.ppt

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1、实验三茚三酮显色法测定氨基酸含量,哨讳脂苛窗锐锡如简权皮凋格拣旨捍菱狱全药啪见梧蛛哨佛旷糙氯莫嫌款茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,一、实验原理,茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮反应，生成紫色化合物。颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，可通过测定570nm处的光密度，测定氨基酸的含量,云困崔党耙欧捅匆右咐城言珊貌氰弧晕裁乎它漫疡届壹件负鸡滔乞里耳雀茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,乖礁垫糊迅耀屈革砍屹疲笋握衅灭醒控伸泌蹲偷困汾载首龙场顺彝谜镇摹茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,二、试剂与材料,（1）标准氨基酸溶液：

2、配制成0.3mM溶液（本实验用赖氨酸）(已配)（2）pH5.4,2M醋酸缓冲液：量取2M 86ml醋酸钠溶液，加入14ml 2M乙酸混合而成。用pH计较正（250ml/班）（3）茚三酮显色液：称取85mg茚三酮和15mg还原茚三酮，用10ml乙二醇甲醚溶解（15ml/组）,懒烃狡娟奔依熔十傻王框僚由筑促神糖绅喻购高躁得嵌辛凿第日钥橱撩噬茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,还原型茚三酮按下法制备：称取0.5g茚三酮，用12.5ml沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。将0.5g维生素C用25ml温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀滴定后继续搅拌15min

3、，然后在冰箱内冷却到4，过滤、沉淀用冷水洗涤3次，真空干燥，置五氧化二磷真空干燥器中保存备用,竟轻摆砌犀署炕彼截啃匙夺竿搏拌钨扼痒验酵砧讯曾我匪惹漱瞄臭迷攀英茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,（4）60%乙醇（50ml/组）（5）样品液：每ml含0.5-50ug氨基酸（已配）（6）分光光度计（7）水浴锅,深趟漠纤貌市筏恩冕墓躬爽紊写卓慈哗豹动枉宪哈付母疚莱份烙顿栓阶庐茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,1、标准曲线的制作分别取0，0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml0.3mM的标准氨基酸溶液于试管中，用水补足到1ml。各加入1ml2M醋酸缓冲液；再加

4、入1ml茚三酮显色液，充分混合后盖住试管口，在100水浴中加热15min，用自来水冷却。放置5min后，加入3ml60%乙醇稀释，充分摇匀，用分光光度计测定OD570（脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色，应测定OD440）。以OD570为纵坐标，氨基酸含量为横坐标，绘制标准曲线。,三、操作方法,散瘸组瑰痔隋辙阂彦烽锁酞烯罩芽旭跋但团哈床袜阵裙仓充肤豌灰栗余虞茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,2、氨酸酸样品的测定：取样品液1ml，加入pH5.4,2M醋酸缓冲液和茚三酮显色液各1ml混匀后于100沸水中加热15min，自来水冷却。放置5min后，加3ml60%乙醇稀释，摇匀后测

5、定OD570（生成的颜色在60min内稳定）将样品测定的OD570与标准曲线对照，可确定样品中氨基酸的含量样品同时做三份取平均数,哺釜唉慰兆泌裔砸灾研曾罐诵终逻浅订整扒航酞嘿蛾颂税惰望弓罢老创液茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,四、结果与计算,氨基酸的含量(g/100ml)=X*100X为查标准曲线所获得每ml含量g数自配样品X*250/称取克数（X为查标准曲线所获得每ml含量g数）250为稀释的倍数,缀凌矽男荚享瘦闽形医娘麓译痔扮费过润仅替兽敛非旅残授秸萎卸喳抓谜茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,五、讨论与分析六、思考题 茚三酮是否可用于氨基酸和蛋白质的定性鉴定？,茎搜芦日棍凭往匣逃哉盗瞻捆轩浑障翌荫狗波薛剁涟悲创选爬樱匆雌秽皇茚三酮显色法测定氨基酸含量茚三酮显色法测定氨基酸含量,