采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究.ppt
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1、采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,入稀秋贫砍琶配痹墒保群仔孵姜鲤葡娇锗疼衍疆决箔直蓑毡掸坷蟹锈猛杏采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,Contents,引言,病原侵入过程与互作,实验操作流程,结果分析及展望,4,1,2,3,嗓钡下癣惹送驭娄职涝阅靖召椅挟凋筋海虫靠摈清况犁乡涂补晒岁罕昧杆采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,引言,苹果炭疽病是黄河故道地区苹果树三大病害(轮纹病!炭疽病和早期落叶病)之一,近年来,随着主栽品种的更迭,质优但感病品种的栽培面积不断扩大,该病的发生与危
2、害日趋严重,给苹果生产造成了很大的损失,严重影响了苹果的质量和产量。果实采后腐烂是一个全球性问题,新鲜水果在采收、分级、包装、运输、贮藏、批发、零售整个采后流通过程中都有可能腐烂损失。果实产品变质腐烂的原因可以归结为三个方面:1、果实组织的生理失调或衰老 2、病原微生物侵染 3采收及采后环节中的机械损伤 三者相互影响,但最终是病原微生物侵染引起果蔬采后腐烂,弹垂瓷剁络公洪琐哑挨蕴压戍颠枫运啥点谗被赶佳旱摹搬伎纳策拣潜恍歧采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,病原介绍,Glomerella cingulata(Stonem)Spauld et
3、Schrenk为子囊菌小丛壳菌。无性世代Gleosporium fructigenum Berk.为半知菌黑盘孢目,果生盘长孢菌。温度、湿度、PH对病原菌的影响 一、炭疽菌适应于高温高湿“菌丝在20一30生长良好,生长最适温度为28,最低和最高温度分别为10 和35 分生抱子萌发以为25 最好。二、相对湿度小于80%时菌丝不能生长,分生抱子萌发对湿度要求严格,仅在自由水和有水膜的情况下萌发。三、pH3一H范围内均可营养生长,pH2一11范围内抱子均可萌发,酸性条件下抱子萌发率较碱性条件下高。,央拢升银炬焉悼咨垃上孔沾锻来津走罩饰涡郡涯珠溶凝耶伪咬竞迅爷寝认采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机
4、理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,炭疽菌侵入结构与过程,产生单一芽管,产生附着胞,穿透菌丝,初生菌丝,炭疽病菌具有潜伏侵染特性,苹果幼果期感染后,病菌常以侵染丝在果皮中滞育,不发病,待果实近成熟时或贮运期间才陆续发病果实发病一般从果点即皮孔开始发病,维淖市索挖盛缺扔稚讲错荫盖尚啥卤挝巴爹悸琉练坷枢删矾既岿狠靖页盒采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,病原真菌致病机制,植物病原真菌通常可向外分泌细胞壁降解酶、毒素、激素、多糖等物质,它们在致病过程中起重要作用,称为致病生化因子。植物细胞壁一般分为3部分:中胶层、初生壁和次生壁,
5、其主要组成成分为果胶化合物、纤维素及半纤维素,这些成分构成了植物体的天然屏障,阻碍了病菌的侵入。病原分泌能够降解植物细胞壁的酶(CWDE),包括果胶酶、纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、磷酸脂酶等类型,这些胞壁降解酶协同作用可引起寄主组织浸解,参与病害的扩展。植物细胞的大规模死亡和组织的崩溃,细胞死亡的原因是裂解酶木身的毒性或酶分解的果胶(peetin)或多聚半乳糖普(polygalaetose)片段激发寄主的过敏反应。主要介绍如下:一、胞壁讲解酶(果胶酶、纤维素酶)二、其他致病因子(毒素、激素),断弓董馈逮凸口麦望依苯衣敞肝迁酶气出秤难圆本爽妻废镊靳吗若抱曾粒采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理
6、研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,果胶酶与纤维素酶,果胶酶是病原菌引起果蔬采后腐烂病斑或软腐过程中起关键作用的一组胞外酶。果胶酶依据降解底物不同!a一糖营键的分裂机制以及在果胶上断裂的位置分为两类:(1)果胶甲基酷酶(peetinmethylesterase),(2)果胶水解酶(peetiehydrolases)和果胶裂解酶(peetielyases)果胶甲基酯酶(简称PME)作用是从果胶质中除去甲基基团以产生果胶酸。果胶水解酶和果胶裂解酶的共同作用特点是使a一1,4糖营键断裂但水解酶作用 部位是a一1,4键。半乳糖醛酸酶(peetinmethylgalacturonase,简
7、称pMG)和多聚半乳糖醛酸(polygalaeturonase,简称pG)是两种分别以果胶质和果胶酸为基质的水解酶。苹果成熟后,组织中果胶甲酷酶活化,使果胶脱去甲基,在病原的多聚半乳糖醛酸酶作用下,组织崩溃加速“成熟的苹果容易受到病原菌侵染,原因就在于此。纤维素酶是一种多组分酶,包括C1酶、CX酶和-葡萄糖苷酶三种主要组分。,奈怂旁洗晾榴赫庶脑花普攒路淮盟屈危铣莲递碳摸内铅抚拍闪满痞缀鹤厅采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,胞壁降解酶作用机制,降解酶侵入植物组织浸离和细胞死亡的作用(l)对侵入的作用:产生角质酶,形成侵入孔(2)对组织浸离的
8、作用:果胶降解酶能使组织中细胞分离,导致组织浸离(3)对细胞死亡的作用:直接作用:细胞壁降解后,丧失对原生质体的支持力,膨压增加引起膜伸展和破裂 间接作用是:胞壁降解酶作用于植物组织后释放有毒物质造成细胞死亡,胞壁降解酶的合成受底物或底物降解产物的诱导和抑制(1)诱导作用:有些降解酶,病原物产生的基础水平很低但当有底物存在时,基础水平酶作用后的产物对该病原物的产酶活性有明显增强作用。(2)抑制作用:病原物降解酶受底物或底物降解产物诱导,但当该底物降解产物浓度很高时,又会抑制这些酶的活性,这种现象称为代谢物抑制。,退扯瓮湃垒竞橱答啥浊缘角起赡答凯切害穆绘努筑妆逸窄桑呛灿瘁树寻恢采后苹果与炭疽菌的
9、相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,植物抗病机制,植物抗病性按作用机制不同可分为被动抗性和主动抗性两类。被动抗性:指植物被病原物侵染前即已具备的抗病性。抗病组分:角质层、蜡质、木栓质、木质素、酚类化合物、生物碱和水解酶。主动抗性:病原物侵染所诱导的抗病性。真菌细胞壁降解酶在植物防御反应中,几丁质酶(Chitinase)和一l,3一葡聚糖酶(B一l,3一glueanase)能降解病原真菌细胞壁。寄主主要防御酶苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonia一lyase,PAL)是连接初级代谢和苯丙烷类代谢!催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶,是苯丙烷类代谢
10、的关键酶和限速酶,参与植保素和木质素的合成多酚氧化酶(polyPhenoloxidase,PPO)氧化寄主或寄生物的重要代谢产物,如酚类物质!酶及毒素!IAA等的能力POD能催化木质素前体如松柏醇脱氢氧化(Whitemore,1978),木质素能提高细胞壁的机械强度和钝化病菌产生的细胞壁降解酶,阻止病原菌的侵入扩展“过氧化物酶(Peroxidase,POD PPO和POD两种酶参与了植物一病原菌互作的寄主植物生理过程这些生理过程包括酚类化合物的氧化!木质化!细胞壁组分的交联!伤口的愈合!生长素的氧化和系统抗性的诱导.,憾俗失郊崭躁豪僚座笼妨啪龄疹四月雅玩眉烛辛忱净魂购震叹诀四碟葱戎采后苹果与炭
11、疽菌的相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,与抗性相关的生化物质,糖是植物光合作用的产物,苹果采后,随着淀粉转化成糖,果肉组织可溶性糖含量提高,果实组织衰老和物质泄漏增加,导致炭疽菌可利用的营养物质增多。酸性物质有利于细胞的木质化,主要抑制病菌在果实内的扩展。木质素木质化作用的病理功能:一、木质素使细胞壁增强了抗真菌机械侵入的能力,二、可抵抗真菌酶的降解,另外,木质素沉积所形成外壳,减少了细胞壁降解酶与多糖接触的机会;三、限制真菌酶和真菌毒素向寄主的扩散 四、可以钝化真菌的生长点,限制真菌的生长。酚类物质小分子量的酚类化合物可破坏病原菌的细胞膜,使其菌丝体在胞
12、壁内聚合,降低病原菌生长所需的粘度。某些酚类物质还可使病原菌体内的一些酶失活,从而抑制其活动,防止毒素的产生,皆烛肉俞白否捍瞻怜侨力裳绊铂盯图鸵组角氛扛挟狄释咙柠詹导允谊申摹采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,实验操作材料,采后苹果果实,五个品种:红富士、黄金帅、乔纳金、嘎啦、辽伏。苹果炭疽菌。,供试苹果与菌株,马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、查彼(ezaper)培养基、牛肉膏蛋白陈培养基,供试培养基,o.25moL/LNaCL,0.05moL/LTris一HCL缓冲液(pHS.o),o.osmouL醋酸一醋酸钠缓冲液(pHS.0),1%
13、果胶,l%CMC,0.2moL/L醋酸缓冲液(pH=5.0),0.1%愈创木酚,0.08%HZO:溶液,0.o5M磷酸缓冲液(pH=6.8),o.oZM邻苯二酚溶液,10,0聚乙烯毗咯烷酮(pVp),石英砂,0.IM硼酸缓冲液(pH一5.7),o.6xlo一,mmoL/LL一苯丙氨酸,6moL/LHeL,0.IM柠檬酸一o.ZMN处HpO4(pHS.0),10,0(W丹)昆布糖,lg/loomL,酶活性测定主要试剂,蕙酮试剂,3,5一二硝基水杨酸(DNS)试剂,0.lmoULNaOH,酚酞指示剂,70%甲醇,FoLLin试剂,1%醋酸,丙酮,72%硫酸,0.05m0L/L重铬酸钾一硫酸,淀粉指
14、示剂,考马斯亮蓝G一250试剂,生化物质测定试剂,喉氮鲜值惟凝休窑帆苔李楔贰骄碌厌态轮暇掷弦汽洼陇苑茁僧笔哎噪侈驼采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,实验方案设计与分析,主要实验内容:一、病情指数测定二、苹果炭疽病致病机理研究(1)活体外炭疽病细胞壁降解酶培养与提取(2)罹病组织细胞壁降解酶提取(3)PMG活性测定(4)Cx活性测定(5)还原性糖与蛋白质测定三、苹果提取液对孢子萌发的影响四、不同品种苹果对炭疽病抗病机制研究(1)接种方法(2)真菌细胞壁降解酶活性测定(1,3葡聚糖和几丁质酶)(3)寄主主要防御酶测定(PoD、PPO、PAL)
15、(4)与寄主抗性有关生化物质测定(可溶性糖、有机酸、木质素、绿原酸),结果与分析:一、品种抗病性鉴定二、苹果炭疽病致病机制研究:(1)活体外炭疽菌细胞壁降解酶活性(2)活体内炭疽菌的细胞壁降解酶活性三、苹果提取液对孢子萌发的影响四、不同苹果品种抗性机制研究(1)1,3葡聚糖活性测定(2)感染后POD活性变化 不同品种间的差异性 距离菌斑不同距离的差异(3)感染后PPO活性变化 不同品种间的差异性 距离菌斑不同距离的差异(4)感染后PAL活性变化 不同品种间的差异性 距离菌斑不同距离的差异五、与抗性有关生化物质活性变化六、总结,洋村腑眩注辈瓜肯敦瞬年菊库贼破再皖几励航滴遵爹踩猜丧忱氓脑揭跟伦采后
16、苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究,病情指数测定方法,成熟期果实,每个品种用菌丝圆片作皮孔刺伤贴菌处理,每个处理设3个重复,每个重复10个果实,每个果实接种3点。处理后25放置,保湿48h。刺伤接种第5d时,按下列分级标准调查。计算病情指数用新复极差法进行显著性方差分析,对品种抗性分级0:未发病1:病斑直径=5mm,且病斑向果心扩展的距离=lmm2:病斑直径=5一10mm,且病斑向果心扩展的距离=l一5mm3:病斑直径10mm,或病斑向果心扩展的距离5mm,呈虑冬捕脚雹刑浪晌殉误呐己腕清吵捌秀棉锅黄题晃攻掉渝垂卸咋初砍少采后苹果与炭疽菌的相互作
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- 苹果 炭疽 相互作用 病害 控制 机理 研究

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