无菌检查用培养基灭菌后的保存有效期的验证方法.docx

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1、无菌检查用培养基灭菌后的保存时限验证方法1.项目描述质量控制部无菌检查用培养基为硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆陈液体培养基，此两种培养基均为商品化的脱水培养基。根据中国药典2020版规定，无菌检查用的硫乙醉酸盐流体培养基和胰酪大豆豚液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求，制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在225、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。因此，拟对胰酪大豆月东液体培养基及硫乙醛酸盐流体培养基在灭菌后的保存期进行验证，验证方法为：培养基灭菌后冷处保存（冰柜保存210）,确认在保存期内两种培养基的PH值、无菌性及灵敏度是否符合要求；每种培养基应进

2、行三个配制批次验证；分别确认培养基在灭菌后保存0天、1天、2天、3天、4天、5天的PH值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求；根据验证结果，确认硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆腺液体培养基在灭菌后的保存时限。2 .目的对无菌检查用培养基灭菌后的保存时限进行验证，确认无菌检查用培养基灭菌后在保存有效期内的PH值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求。3 .范围本验证文件的范围仅适用于质量控制部无菌检查用培养基制备好后的保存时限的验证，验证项目包括：先决条件确认、实验设备及器材确认、培养基确认、灭菌效果确认、包装储藏确认、培养基PH值确认、培养基无菌性检查确认及培养基灵敏度检查确认。4 .职责4.1

3、质量控制部职责：负责验证方案、报告的起草；负责按照批准的方案进行验证操作；负责对验证数据进行收集、整理、分析；负责记录在确认过程中所有发生的偏差及变更；负责针对偏差及变更，并提出解决方案，以采取纠正行动；负责验证过程中的相关检验工作；负责验证结果的总结、分析评价工作；负责人负责审核文件。4.2 质量保证部职责：负责监督整个验证活动，确保验证按计划进度进行；负责过验证项目的验证；负责对验证数据进行收集、整理、分析；负责变差、变更的调查和处理，偏差调查报告及变更情况上报审批；负责人负责审核文件。质量管理负责人职责：负责最终批准文件。4 .3质量管理负责人职责：负责最终批准验证文件。5 .参考标准中

4、国药典2020版6 .验证实施6.1 先决条件确认6.1.1 目的：确认所有进行验证的先决条件已经得到满足。6.1.2程序：6.1.2.1确认本验证方案是否已得到批准；6.1.2.2执行本方案的人员是否经过培训；6. 1.2.3检查确认后填写附件表1中的相关内容，并签字确认。6.1. 3可接受标准：本验证方案得到批准，执行本方案的人员已得到培训I。6. 1.4先决条件确认报告：见附件表1；如发现偏差应记录在偏差报告中。6.2实验设备及器材确认6. 2.1目的:确认实施过程中所需的所有设备、器材是否正常、完整。7. 2.2程序：8. 2.2.1查阅实施过程中所用设备、器材是否正常、完整。9. 2

5、.2.2检查确认后并填写附件表2中相关内容，并签字确认。10. 2.3可接受标准：所有实施过程中所用设备、器材正常、完整。11. 2.4验证用实验设备、器材确认报告：见附件表2。6.3培养基确认6.3.1目的：确认培养基质量及配制是否符合要要求。6.3.2程序：6.3.2.1培养基质量确认检查确认验证用培养基的品名、批号、数量、生产单位、外观形状（瓶盖密封度、内容物有无结块霉变等），处方和使用说明、有效期、储存条件，及生产商提供的质控报告。检查确认后将确认结果填入附件表3中。6.3.2.2培养基配制确认硫乙醇酸盐流体培养基的配制：按照硫乙醇酸盐流体培养基-水（29.25g:IL）比例称取硫乙醵

6、酸盐流体培养基，加热煮沸使完全溶解，摇匀分装于无菌检验用专用瓶内（500ml瓶）,121高压灭菌15min,即可。胰酪大豆陈液体培养基的配制：按照胰酪大豆月东液体培养基-水（29.8g:ID比例称取胰酪大豆陈液体培养基，微温溶解，分装于无菌检验用专用瓶内（500m瓶），经121高压灭菌15min,灭菌后，即可。配制结束后将配制口期、配制编号、配制量及分装数量记录在附件表3中。6.3.3可接受标准：培养基质量应符合要求，培养基的配制应按说明上的要求操作。6.3.4培养基配制确认报告：见附件表3；如发现偏差应记录在偏差报告中。6.4灭菌效果确认6.4.1目的：确认培养基灭菌效果是否符合要要求；6.

7、4.2程序：6.4.2.1将压力蒸汽灭菌化学指示卡放入灭菌锅最冷点处，与培养基同时灭菌。6.4.2.2灭菌完毕后将指示卡抽出，观察颜色变化。6.4.3可接受标准：指示卡达到标准黑色以上，表示符合灭菌条件。6.4.4灭菌效果确认报告：见附件表4；如发现偏差应记录在偏差报告中。6.5包装、储存条件确认6.5.1目的：确认灭菌后培养及的包装及储存条件是否符合要要求。6.5.2程序：6.5.2.1包装确认灭菌后查看无菌检验专用瓶是否完好，胶塞及螺纹盖是否完好正常，确保其密闭性符合要求。6.5.2.2储存条件确认检查确认储藏培养基的冰柜是否正常，温度是否可以控制在210。6.5.3可接受标准：灭菌后的无

8、菌检验专用瓶完好，胶塞及螺纹盖完好正常；冰柜温度控制范围210。6.5.4包装、储存条件确认报告：见附件表5；如发现偏差应记录在偏差报告中。6.6PH值确认6.6.1目的：确认培养基在灭菌后各保存期内的PH值是否符合要要求；6.6.2程序：6.6.2.1分别在培养基配制灭菌后的第。天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天，取培养基适量置烧杯中，测定其在25C的PH值。6.6.2.2将测定结果填入附件表6中，并签字确认。6.6.3可接受标准：硫乙醇酸盐流体培养基灭菌后在25C的PH值为7.l0.2；胰酪大豆陈液体培养基灭菌后在25的PH值为7.3O.2o6.6.4PH值确认报告：见附件表6;如

9、发现偏差应记录在偏差报告中。6.7无菌性检查确认6.7.1目的：确认培养基灭菌后在不同保存期的无菌性检查是否符合要求。6.7.2程序:对0天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天各取装量为500ml瓶的两种培养基各1瓶，经隔离系统表面灭菌后，分别抽取硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆陈液体培养基各100ml至于培养器内，两种培养基各1管，硫乙醇酸盐流体培养基在3035C培养14天，胰酪大豆陈液体培养基在2025C培养14天，逐日观察。将实验结果填入附件表7中，并签字确认。6.7.3可接受标准：灭菌后的每批培养基经14天培养，应无菌生长。6.7.4无菌性检查确认报告：见附件表7；如发现偏差应记录在

10、偏差报告中。6.8灵敏度检查确认6.8.1目的：确认培养基灭菌后在不同保存期的灵敏度检查是否符合要求。6.8.2程序：6.8.2.1菌种确认培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株的生物学特性。检查确认菌种名称、菌种标准号、工作菌种编号、来源、传代次数，检查确认后将结果填入附件表8中，并签字确认。金黄色葡萄球菌(StaPhyIoeOCCUSaureus)CMCC(B)26003铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)CMCC(B)10104枯草芽抱杆菌(Bacillussubt

11、ilis)CMCC(B)63501第4页共24页生抱梭菌(ClOStridiUnIsporogenes)CMCC(B)64941白色念珠菌(Candidaalbicans)CMCC(F)98001黑曲霉(Aspergillusniger)CMCC(F)980036.8.2.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆腺液体培养基或胰酪大豆月东琼脂培养基上，接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，3035培养1824小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，2025C培养2448小时，上述培养物用0.9%无菌氯化

12、钠溶液制成每Im含菌数小于100CfU(菌落形成单位)的菌悬液。用0.9%无菌氯化钠溶液制成每ImI含胞子数小于100cfu的黑曲霉泡子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28可在24小时内使用。将活菌计数结果填入附件表9中。6.8.2.3培养基接种分别在培养基灭菌后的。天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天进行如下实验：取硫乙醇酸盐流体培养基2瓶,经隔离系统表面灭菌后，抽取硫乙醇酸盐流体培养基于培养器中，每管100ml,共7管，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生袍梭菌各2管，另1管不接种作为空白对照，培养不超过3天；取胰酪大豆陈液体培养基2瓶，经

13、隔离系统表面灭菌后，抽取胰酪大豆豚液体培养基于培养器中，每管100ml,共7管，分别接种小于100cfu的枯草芽袍杆菌、白色念珠菌、黑曲毒各2管，另1管不接种作为空白对照，加枯草芽泡杆菌的培养基培养不超过3天，加白色念珠菌及黑曲霉的培养基培养不超过5天。逐日观察结果。将实验数据填入附件表9中，并签字确认。6 .8.3可接受标准：空白对照管应无菌生长，所有加菌的培养基管应生长良好。7 .8.4培养基灵敏度检查确认报告：见附件表9；如发现偏差应记录在偏差报告中。8 .偏差清单将所有验证方案执行过程中所发现的偏差整理成清单，并将偏差内容列在附件表10中。9 .变更控制如果验证过程中发生变更，应对变更

14、部分的内容进行确认，并经过质量管理负责人批准，并将变更清单列在附件表II中。10 总结及评价由质量控制部硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆陈液体培养基灭菌后的保存时限验证方案执行人员负责收集执行过程中的相关资料和数据，并做最终的总结及评价，并填写最终结论。由质量控制部及QA部门对验证和最终结论进行审核，审核应包括：10.1 行过程中是否有遗漏？10.2 施过程中对验证方案有无修改?修改原因、依据以及是否经过批准？10.3 程中的记录是否完整？9 .4结果是否符合标准要求?偏差及对偏差的说明是否合理?是否需要进一步补充确认？9.6由质量管理负责人批准对和最终结论进行批准。10 .附件清单表1：先决条

15、件确认表相关人员培训记录培训内容：培训教师：培训日期：被培训人：培训情况确认序号项目接受标准检杳旨果是否1人员培训执行本方案的人员已得到培训2验证方案验证方案已得到批准结论：璐U人RIUlatuQJffi序号设备、器材名称型号生产厂家是否正常、完整是否结论：确认人日期复核人日期1.硫乙醇酸盐流体培养基生产单位：批号：质量确认是否在有效期内贮藏条件外观形状是否正常处方和说明书生产商提供的质控报告是否是否有无有无配制确认配制日期配制编号配制量分装数量2.胰酪大豆陈液体培养基生产单位：批号：质量确认是否在有效期内贮藏条件外观形状是否正常处方和说明书生产商提供的质控报告是否是否有无有无配制确认配制日期

16、配制编号配制量分装数量结论：确让人口期灭菌时间培养基名称培养基配制编号接受标准指示卡实验结果是否符合要求是否硫乙醇酸盐流体培养基指示卡达到标准黑色以上胰酪大豆陈液体培养基硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆陈液体培养基硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆豚液体培养基指示卡粘贴处指示卡粘贴处指示卡粘贴处结论：确n人日期用核人表5：包装、储藏条件确认确认项标准确认结果是否符合要求是否包装灭菌后的无菌检查用专用瓶完好无裂纹，胶塞密闭完好，螺纹盖完好无裂纹。储藏条件2IOC,避光结论：确认人日期复核人日期培养基名称配制编号PH值(25C)。天1天2天3天4天5天硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆陈液体培养基接受标准：硫乙醇

17、酸款流体培养基灭菌后在25C的PH值为7.10.2；胰酪大豆腺液体培养基灭菌后在25C的PH值为7.30.2,结论：确UH期后核人Hlffl菌种名称菌种标准号工作菌种编号来源传代次数结论：确认人日期复核人口期培养基名称配制编号结果保存时间Ol020304050607080硫乙醇酸盐流体培养基第O天第1天第2天第3天第4天第5天第O天第1天第2天第3天第4天第5天第O天第1天第2天第3天第4天第5天确认人日期复核人日期培养基名称配制编号结果保存时间01020304050607080胰酪大豆陈液体培养基第。天第1天第2天第3天第4天第5天第0天第1天第2天第3天第4天第5天第0天第1天第2天第3天

18、第4天第5天检查标准硫乙醇酸盐流体培养基在3035培养，胰酪大豆陈液体培养基在2025C培养，培养14菌牛K用“-”表示.接受标准在14天内应牙菌牛长C结论：确认人日期用核人日期培养基配制编号保存时间灵敏度检查结果菌种金黄色葡萄球菌生抱梭菌硫乙醇酸盐流体培养基O大计数接种培养时间（天）1231231结果1天计数接种培养时间（天）1231231结果2天计数接种培养时间（天）1231231结果3天计数接种培养时间（天）1231231结果4天计数接种培养时间（天）1231231结果5天计数接种培养时间（天）131231结果确认人日期复核人日期培养基配制编号保存时间灵敏度检查结果菌种金黄色葡萄球菌生抱

19、梭菌硫乙醇酸盐流体培养基O大计数接种培养时间（天）1231231结果1天计数接种培养时间（天）1231231结果2天计数接种培养时间（天）1231231结果3天计数接种培养时间（天）1231231结果4天计数接种培养时间（天）1231231结果5天计数接种培养时间（天）131231结果确认人日期复核人日期培养基配制编号保存时间灵敏度检查结果菌种金黄色葡萄球菌生抱梭菌硫乙醇酸盐流体培养基O大计数接种培养时间（天）1231231结果1天计数接种培养时间（天）1231231结果2天计数接种培养时间（天）1231231结果3天计数接种培养时间（天）1231231结果4天计数接种培养时间（天）12312

20、31结果5天计数接种培养时间（天）131231结果确认人日期复核人日期培养基配制编号保存时间灵敏度检查结果菌种枯草芽泡杆菌白色念珠菌胰酪大豆陈液体培养基O大计数接种培养时间（天）123123451结果1天计数接种培养时间（天）123123451结果2天计数接种培养时间（天）123123451结果3大计数接种培养时间（天）123123451结果4天计数接种培养时间（天）123123451结果5天计数接种培养时间（天）123123451结果确认人Ed期复核人日期培养基配制编号保存时间灵敏度检查结果菌种枯草芽泡杆菌白色念珠菌胰酪大豆陈液体培养基0天计数接种培养时间（天）123123451结果1天计数

21、接种培养时间（天）123123451结果2天计数接种培养时间（天）123123451结果3大计数接种培养时间（天）123123451结果4天计数接种培养时间（天）123123451结果5天计数接种培养时间（天）123123451结果确认人Ed期复核人日期培养基配制编号保存时间灵敏度检查结果菌种枯草芽泡杆菌白色念珠菌胰酪大豆陈液体培养基O天计数接种培养时间（天）123123451结果1天计数接种培养时间（天）123123451结果2天计数接种培养时间（天）123123451结果3大计数接种培养时间（天）123123451结果4天计数接种培养时间（天）123123451结果5天计数接种培养时间（天）123123451结果加金黄色葡萄球菌、生抱梭菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌的培养基管3035C培养3天，白色念珠械且怀，出生长良好用“+”表示，生长不良好或无菌生长用“-”表示。接受标准空白白对照管应无菌生长，所有加菌的培养基管应生长良好。结论确认人日期复核人日期表10：偏差处理清单偏差号偏差概述偏差是否关闭关闭日期负责人是口否口是口否口是口否口确认人日期复核人日期表11：变更控制清单变更号变更内容概述变更是否关闭关闭日期负责人是口否口是口否口是口否口确认人日期复核人日期11.文件变更历史文件版本号执行日期变更原因、依据及变更内容VPOOll012021.06.10新文件建立