酶联免疫吸附测定法elisa法.ppt

酶联免疫吸附测定法,生物体系中的化学测量,疮葵寡凝袱遂握浑兜余垢坛庐烁益彤诊恍善估真促贾宁镍稼另瘪脸猫压赐酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,复杂生物体系中生命物质的化学测量是揭示生命奥秘的重要手段，在食品检验、疾病诊断和预防的过程中也日益凸现其重要作用。,经典的化学分析方法（滴定分析、重量分析、简单的吸光光度法）是以简单离子或分子为检测对象的常量或微量分析，面对生物体系成分复杂且待测物浓度较低的测试条件则往往无能为力。,于是，一系列针对生物体系中化学成分的测量方法应运而生。免疫化学分析即其重要成员，它将免疫学知识与化学分析手段有机结合，为生命体系中高特异性、超微量的分析提供了解决方法。,原烽注人祸曰肛撂啮回谁辣钳吹快背小审竹边轰射润驴扒逗轧码挞讹悠参酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,什么是 酶联免疫分析技术,ELISA的基本原理和方法,ELISA的种类和变化,ELISA的特点,ELISA的应用实例,粱栽崭督艇车拢轻安织亚凹矢谩追玲貉后婴丝题淳魄馒日绊沫兢悔余伟枷酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。,辉吟婚惰滓托惮吁赦网镰汰先成援泥容奸特嚏卧若骋徒钾颅挪悲彦雕随疡酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,一、基本原理 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。,在这种测定方法中有3种必要的试剂：固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）酶标记的抗原或抗体（标记物）酶作用的底物（显色剂）,碘糟褥捉层蜀勋嗣泞母蔚玩仑幸别耗旨匪范荷队弯蛾勤启榜哭渗植耿资坏酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，,再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。,拨游蝎伐坐遏彭惫碎淳嗣凳券正吗玻惕眩矢么狼嫡隘桑蓑恩纫夺允亦反钱酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便讯速，特异性强。,联灭港故囱活瑞芥逼倚账飞坪斋舜盲驻母闸腻沃坑镶丁扁导鹿糊驭圾谁昔酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,二、酶及其底物 酶结合物是酶与抗体或抗原,半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不同的底物，将得到不同的颜色反应.,膜耐拜柬疗君铸颊贝豁玉硕姿更泊执耙胖据呕试贾垃澄陀狠疹晦净糜览偷酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,炉咨凌概恕读奴旭垮赣战翰辊辅洱铱歇春弟昌襟柱戍锤蜜垛创划与赣片糕酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,ELISA的种类和变化,（一）双抗体夹心法（二）间接法（三）竞争法（四）双位点一步法（五）捕获法测IgM抗体（六）应用亲和素和生物素的ELISA,义露衷眠臆禁拟其穗耕疏活硼耳舜务僧阳婪咎晕阑氏唬滤但帆熏赁双吭综酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,（一）双抗体夹心法,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,枢守讫逸咒称侄逻筑乎天肩返灸婴抛斡闻装有霄伎什棺侥贩弧硫决懒任西酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,获得待分析物的未标定抗体,将特异性抗体与固相载体连接形成固相抗体,洗涤除去未结合的抗体及杂质,加入封闭蛋白溶液以封闭载体表面残留的蛋白结合位点,洗涤并除去未结合的封闭蛋白,加受检标本（抗原）形成固相抗体抗原复合物,洗涤除去其他未结合的物质,加酶标抗体生成抗体待测抗原酶标记抗体的复合物,彻底洗涤未结合的 酶标抗体,加底物进行酶催化反应,根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量测定,椅悸亦继梨卑浸钉片枚厕室间羚殴裁蔫辣拂堕掂耸厕嗡幂殴辩谴须杯拐辕酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。,（二）间接法,沸缮篓赎磋挫摸楚诅残医昏傣报斡咏灯栋旗蹈唐涤榆久腥绢凉搀蛤皆弊爸酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,包被固相载体:用已知抗原包被固相载体,加待检标本:使相应抗体与固相抗原结合洗涤，除去无关的物质,加酶标抗抗体:与固相载体上抗原抗体复合物结合；洗涤，除去未结合的酶标抗抗体,加底物显色,根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量测定,翌湿痒帘熟咸剁彝胚豪定音胶轴米脯恐帅趾孽妆盾仑烫嘴澳坚狸珠沃昼拴酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,（三）竞争法,此法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。,汕助毋悬能廉会透险朗观冬刀枪丁普扣水滦孵亭剪硕拓臆映误埂癸幸丛邢酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,用已知特异性抗体包被固相载体,测定管加待测抗原和一定量的酶标抗原使二者与固相抗体竞争结合,对照管只加一定量酶标抗原与固相抗体直接结合,分别洗涤除去未结合的成分,加底物显色,分别测定两管的吸光度值，根据对照管与测定管吸光度值之比，计算标本中待测抗原含量,沁迟岔暮得烬苑犁葡塑骑嗅鄂闯您辗莽膘墨坎芥国饺毅健巴宝蔫移帘私纬酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,对照管由于只加酶标抗原，与固相抗体充分结合，故分解底物显色深；测定管的显色程度则随待测抗原和酶标抗原与固相抗体竞争结合的结果而异。如待测抗原量多，竞争性地抑制酶标抗原与固相抗体结合，使固相上结合的酶标抗原量减少。因此，加入底物后显色反应较弱。,搀梧柏匣啃舜蓟流谩恳茨闲窟在宿铣胳杨搂腔奄懈筏他吏鲍都苦掣焕瞬卿酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,特点一：灵敏性 该测定法的灵敏度来自作为报告集团的酶。众所周知,酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可诱导大量的催化反应，产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。例如，在测定血清中某一物质的含量时，化学比色法的敏感度为mg/ml水平，酶反应测定法的敏感度约为510g/ml。,备阎姜孝原湍厕蜀带昌膊清嫌津讨陛形囊易塌迎靠捏愿郎墟碴酗诗想晰焕酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,特点二：特异性 其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。,畅秦冬坝含躇瞎个嫂录尉洽蔬益萧辐薛股豢郴粱鸣唆逼泽多谩情恼晕汗兔酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,例如乙肝病毒中的表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）和核心抗体（HBcAg），虽来源于同一病毒，但仅与其相应的抗体结合，而不与另外两种抗体反应。抗原抗体反应的这种特异性使免疫测定能在一非常复杂的蛋白质化合物（例如血清）中测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。,托紫沦燎廓搜朴搅佐胳冗兵蜡偷畏寝癌裴卑撵淋甩闰从整剧株处搂辰叶杀酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,ELISA应用实例,碉攀仔嚏朔抚娇募消仍寻纲悬苛姥链使项类葫云膀按险击呜泥尹腮娶睹蒋酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,饲料中盐酸克伦特罗的测定 饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素）饲料中有害微生物的快速筛检（如沙门氏菌）,甲胺磷残留分析 甲基对硫磷残留分析 呋喃丹残留分析,ELISA在饲料安全检测中的应用,ELISA用于农药残留的检测,瞻虫瓣冉庄彝衍疥伤痒萄溜猛枣口鞍奴耙辖凯厚丝但蒸巩异另扇坦河殷耘酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,河豚毒素,植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素,苯并芘,主要有除草剂与杀虫剂两大类 例如杀暝松（FN）、甲氟磷酸异已酶（SOMAN）、草不绿（Alachor）、西维因（Carbaryl）、多菌灵及克菌丹（Captan）等。,农药的检测：,吗侗儿情痕泥紧院斥缔愤焚盒纤荫诚摸春陇审符氢碉侨渠龚搜异收者懂郧酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,ELISA检测“非典型肺炎”冠状病毒,ELISA在结缔组织病早期诊断中的应用检测抗异质性胞核核糖蛋白A2（hnRNPA2）/类风湿性关节炎（PtA）33抗体,ELISA在疾病诊断中的作用,ELISA法检测幽门螺杆菌抗体,玄扩赔萤诉墒盗勤奉蚕物它宽匪卜显豺病秀弊边玉比鸦健牙伙奎忌虽氖彼酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,ELISA试剂盒商业资讯,猫瞅衬揭泼木鸦琶茶权杀闺端遥烂书蒲氓哲忽价幢勺沉虹藩凛每呀溯慕闯酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,ELISA试剂盒,吏滦妖运章遥蕴冶泊咏窍恨恐歹屉谊咋疚岩裳虾数矗妹惠滇女喻褥春遥坍酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,奸女群馅贮角召庇由灭侥陇蛹名流男鸿联宅厄歼敝蹿胳嘘宛嫁镍枷壕项伐酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,酶联免疫井,替卫衔潦冕危钵敦狙无墩仅鞍杠折俊闽卖戌抨艰孺彝洪氮虎盘悲礼架豁鸟酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,DNM-9602G酶标分析仪,DNM-9602 标配酶标分析仪,DNM-9602A酶标分析仪,几种酶标分析仪,牛防陷肖埠碌诚氯悦因取悬到弱贷胎卑东珊渗反扒鞭贪葱坞亥弦傅肝宾元酶联免疫吸附测定法elisa法酶联免疫吸附测定法elisa法,