软枣猕猴桃组培快繁技术规程.docx

软枣猫猴桃组培快繁育苗技术规程1范围本标准规定了软枣殊猴桃(Actinidiaar8utaPlaneh.)组培快繁育苗技术的仪器设备、环境和设备消毒、培养基制备、外植体培养、炼苗与移栽、生产档案。本标准适用于软枣殊猴桃组培快繁育苗。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GBfT6001育苗技术规程1.Y/T1882林木组织培养育苗技术规程DB23/T1589蓝靛果种苗组培快繁技术规程3仪器设备应符合DB23/T1589的规定。4环境和设备消毒4.1 接种室消毒接种前用紫外灯照射30min°4.2 培养室消毒每周用臭氧消毒40min°4.3 超净工作台的消毒接种前用紫外灯照射30min并用70%酒精擦拭台面，定期清洗超净工作台过滤膜。4.4 接种器具的消毒使用前将枪式镶子、解剖剪、培养皿、解剖刀进行高温蒸汽消毒；接种过程中采用酒精灯灼烧消毒。5培养基制备5.1 母液配制按照LYZT1882的规定执行。5.2 培养基配制按照LY/T1882的规定执行。诱导培养基：MS½三+6-BA0.5mg/I,+ZT1.0mg/L；继代增殖培养基：MS培养基+6-BA1.0mgL+ZT0,5mg/L；生根培养基：MS培养基+IBA0.2mgL05. 3培养基灭菌采用高压蒸汽灭菌，在压力0.105MPa、温度121°C条件下灭菌20min0锅内的灭菌物以不超过锅容量的3/4为宜。5.4培养基保存灭菌后的培养基放入接种室,常温条件下宜在7d内使用，2°C4条件下14d内使用。培养基应保存于洁净环境中，避免阳光直射。6外植体培养1.1 外植体的选择选择生长健壮、无病的植株作为采样母株，剪取当年生的半木质化的茎段作为外植体，采样时间宜选择晴天或露水干后。1.2 外植体灭菌先将外植体用洗涤剂作表面清洗，再将外植体用流水冲洗30min后，将外植体放入消毒瓶中。把装有外植体的消毒瓶放入超净工作台，打开消毒瓶倒入0.1%升汞并摇晃，浸泡消毒3min取出，用无菌水冲洗5次；再用无菌水浸泡40min,用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。1.3 外植体接种与诱导培养将培养瓶的封口膜取下，瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒。枪式镒子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，将表面消毒后的外植体用手术剪刀剪去两端，剪取长约1.0Cm左右的带有单个腋芽的茎段接种于诱导培养基。每个培养瓶放3个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期。培养35d后进行继代增殖培养。1.4 继代增殖培养外植体经诱导培养生成丛生芽，转接至继代增殖培养基中培养。培养35d后再进行继代增殖培养。1.5 生根培养选取培养瓶中长度15cm2.0Cm生长健壮的芽接种至生根培养基中，组培苗生长过程中在基部会出现浅绿色嫩根，培养35d后平均生根数3条以上，根长在LOcm以上即可炼苗。1.6 组培苗培养条件培养室的温度控制在24±2°C,相对空气湿度控制在70%80%,光照强度为2000Lux3000LUX,光照时间为12hd°7 炼苗与移栽7.1 组培苗炼苗将装组培苗的培养瓶从培养架上轻轻取下，迅速转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20°C25,每天中午在培养瓶周围喷洒雾水，封口炼苗3d5d°封口炼苗后打开瓶口，向瓶内注入超过培养基表面0.5Cm高的自来水，温度控制在2025,炼苗Id2d后即可移栽。7.2 移栽用手指或镜子轻轻取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，速蘸0.5%高锌酸钾溶液消毒，移栽至装有黑壤土和粗河沙（混合比例为2：1）的混合基质的育苗盘中。育苗盘规格为35CmX50cm,育苗盘四壁高度不能低于7cm,装入育苗盘中的基质厚度不应小于5cm。7.3 移栽苗管理育苗期保持育苗基质见干见湿，育苗水分管理按照GB/T6001的规定执行。温室空气湿度应保持60%左右，温度控制在2025o8 生产档案应建立生产档案，内容包括：培养基制备、外植体的选择、外植体灭菌、外植体接种与诱导培养、继代增殖培养、生根培养、炼苗与移栽。