输血科微柱凝胶不规则抗体筛查标准操作规程.docx

输血科微柱凝胶法不规则抗体筛查标准操作规程1目的对需要输血治疗的患者进行不规则抗体筛查，有助于选择不含针对某抗体的相应抗原的献血者。2原理微柱凝胶抗人球蛋白检测卡采用分子排阻层析原理在微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，而未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。3范围适用于微柱凝胶法进行不规则抗体筛查。4操作程序4.1 试剂4.1.1 微柱凝胶抗人球蛋白检测卡（长春博讯生物技术有限公司）4.1.2 筛检细胞（I、II、IH）（长春博讯生物技术有限公司）4.2 器材4.2.1 LDZ4-1.2台式普通离心机4.2.2 微柱凝胶法专用孵育箱：FYQ型免疫微柱孵育器4.2.3 微柱凝胶法专用离心分离机：TD-3A型血型血清学离心机4.2.4 IOuK50Hl的微量移液器。4.2.5 玻璃或塑料试管（IoXl2mm或12X15mm）4.2.6 一次性枪头4.3 样本要求：抗凝全血3mL本实验室为EDTA-K2抗凝。4.4 方法4.4.1 选择微柱凝胶抗人球蛋白检测卡，观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，然后将卡平行至室温（15-28）,平衡后用TD-3A型血型血清学离心机离心2-3min0做好标记：填写病人姓名、血型和配血日期，去除卡中微柱凝胶管上的密封铝膜。4.4.2 将已达室温的待检的全血标本使用LDZ4-1.2台式普通离心机离心1000gl-2min（3479转/分离心-2min）,确保加入反应体系中的血浆不含有任何絮状物或颗粒性成分。4.4.3 将4%抗筛红细胞做1:8稀释，然后取稀释好的0.5%抗筛红细胞50U1筛检红细胞I、II、III分别加于标记了I、口、Hl的微管中。4.4.4 取50Hl血浆加于标记了I、II、IH的微管中。4.4.5 将卡置于FYQ型免疫微柱孵育器中，37孵育15min.4.4.6 将卡置于TD-3A型血型血清学离心机中离心，5min,（900rpm2min,1500rpm3min）o4.4.7 离心结束后，立即取出卡，从正反两面检查微管中的红细胞凝集情况，记录结果。4.5 结果判定阴性：未检出不规则抗体（I/II/HI）（注：筛检细胞所包括的不规则抗体）士4+：检出不规则抗体（I/II/III）一：100%的红细胞位于柱的底部；土：100%的红细胞位于柱的下1/3；+：80%的红细胞位于柱的下2/3；2+：80%的红细胞位于柱的上2/3；3+：80%的红细胞位于柱的上1/3；4+：红细胞凝集在胶的顶部；DP（混合凝集）：底部和顶部均有；H：溶血。4.6 注意事项4.6.1 将试验标本即刻离心，仔细检查标本质量，挑出严重溶血、脂血等影响检测结果的标本，及时通知病区重新采集，暂不使用的标本置于4冰箱保存。4.6.2 受血者的标本最好是新近抽取的；也可在2-8°C储存48小时（如果用血浆的话，补体依赖的溶血反应可能检测不到）。4.6.3 仔细检查试剂质量，不可使用溶血、变质、过期的试剂。4.6.4 在一些情况下，由于血清中残留的凝块、纤维残渣可能将非凝集的红细胞包裹在胶的顶部，表现为桃色到红色的分层，容易产生假阳性的结果。由于大多数红细胞在柱的底部，可能干扰阴性结果的判定。推荐将血清在37°C孵育10分钟，离心，再重复试验。4.6.5 完全或部分的溶血应该被认为是阳性结果。4.6.6 急诊患者可以在首次交叉配血时不做抗体筛查，需要在其后补做。4.6.7 仪器保养：每天试验完毕后，用浓度为500mgL的有效氯消毒液擦拭。填写仪器维修保养记录本5.参考文献5.1 中华人民共和国卫生部.中国输血技术操作规程血站部分,天津科技出版社,1997.79-815.2 中华人民共和国卫生部医政司。全国临床检验操作规程.第二版.东南大学出版社,1997.