人民医院皮肤性病科临床技术操作规范2023版.docx

皮肤性病科临床技术操作规范2023版人民医院医院资料仅供参考第1章实验室检查技术操作规范第一节皮肤组织病理检查第二节皮肤免疫荧光检查.一、皮肤直接免疫荧光检查.二、皮肤间接免疫荧光检查.三、补体结合法.第三节皮肤试验.一、斑贴试验二、划破试验.三、皮内试验.四、挥发性变应原（空气播散）试验.五、变应原检测体外试验第四节玻片压诊法.第五节皮肤划痕试验第六节皮肤紫外线最小红斑量测定.第七节滤过紫外线检查第八节真菌检查.一、真菌直接镜检二、真菌培养第九节疥蛾检查第十节蠕形蛾检查.第十一节阴虱检查.第十二节麻风杆菌及麻风相关检查一、皮肤切刮涂片检查二、组胺试验三、出汗试验四、立毛肌试验第十三节淋球菌检查.第十四节衣原体检查.第十五节解胭服原体检查.第十六节梅毒螺旋体检查.一、梅毒螺旋体检查二、梅毒血清学检查第十七节醋酸白（甲苯胺蓝）试验第十八节叶咻检查.第十九节红斑狼疮细胞检查.第2章治疔技术操作规范第一节电疗法.一、电解法二、电干燥术和电凝固术.三、电烙术第二节光疗法.一、红外线疗法二、紫外线疗法三、光化学疗法四、激光疗法第三节药浴.第四节冷冻疗法.第五节放射疗法.>X线疗法二、放射性核素治疗第六节皮肤外科治疗.一、磨削术二、切割术三、体表小外科手术四、腋臭手术第1章实验室检查技术操作规范第一节皮肤组织病理检查皮肤组织病理学改变有时可以协助临床确定诊断。由于皮肤位于体表，活检操作较为简单，皮肤组织病理学检查可作为辅助诊断的重要手段。然而，有时组织学改变呈非特异性，为明确诊断必须反复活检进行病理学检查。【适应证】按皮肤病理诊断的价值依次为：1.皮肤肿瘤、癌前期病变、病毒性皮肤病、角化性及萎缩性皮肤病、红斑鳞屑性皮肤病等有高度诊断价值。2 .大疱性皮肤病、肉芽肿性皮肤病、代谢性皮肤病、结缔组织病、血管性皮肤病、色素障碍性皮肤病、遗传性皮肤病、黏膜疾病等有诊断价值。3 .某些深部真菌病、皮肤黑热病、猪囊尾蜘病（囊虫病）等感染性皮肤病可找到病原体。【禁忌证】严重瘢痕体质者（尤其是特殊部位）应慎重，需要征求患者同意。【操作方法及程序】1.活检取材方法。常规消毒。（2）局部麻醉。（3用手术方法或钻孔器取材刀切法：用手术刀可取较大较深组织，适用于各种皮肤病变，尤其是结节、肿瘤等。钻孔法：较方便，但应用受一定限制。适用较小损害，或病变局限于表浅处，或手术切除有困难者。削除法:用刀削除病变组织，适用于表浅增生组织，如疣状物等。2 .将所取组织按常规固定、脱水、包埋、制片。必要时做组织化学、免疫组织化学及电镜等检查。【注意事项】1.皮损选择一般选择充分发育的典型皮损，须取原发病变。水疮、脓疱宜取早期皮损。有多种病变同时存在时，应分别取材。必要时从皮损边缘取材，半病损皮肤，一半正常皮肤，以便对比观察、如考虑肿瘤和结节性皮肤病，取材应尽量包括皮下脂肪组织。3 .麻醉尽可能在病变周围进行，避免在拟取皮损内直接注入麻醉药。4 .取材取材要根据实际情况，宽、长足够，应包括表皮、真皮及皮下组织。皮下结节须包括皮肤及皮下组织。较小皮损沿其边缘全部取下即可；较大斑块、环状皮损应取活动性边缘；溃疡性病变应取活动性边缘。色素痣切口应稍宽，切口至皮损边缘的距离根据部位不同而定，最好在0.5cm以上。要防止水疱、脓疱破损。活检组织应避免挤压。5 .固定一般用4%甲醛溶液（10%福尔马林溶液）立即固定。固定液与组织体积之比为5：Io6 .术后处理术后用无菌敷料包扎，保持创清洁，选择适当时机拆线。第二节皮肤免疫荧光检查该项检查技术是根据抗原与抗体的结合反应具有高度特异性的特点，采用荧光染料（目前应用较普遍的是异硫氟酸荧光素，其异硫甑基在水溶液中与免疫球蛋白的自由氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键，成为标记的免疫球蛋白，即荧光素标记抗体）标记的已知抗原或抗体，通过荧光光源检查，以发现未知的抗体或抗原。免疫荧光检查实际上是血清学方法与显微示踪技术相结合。根据抗原抗体反应的不同，分述如下免疫荧光检查方法。一、皮肤直接免疫荧光检查【适应证】1.非感染性大疤性皮肤病如各型天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA大疱性皮肤病、获得性大疱性表皮松解症等。7 .结缔组织病如红斑狼疮等。8 .各种血管炎9 .某些感染性皮肤病10 皮肤肿瘤等【禁忌证】同本章第一节“皮肤组织病理检查”。【操作方法及程序】1.从患者受累或可能受累的皮肤组织黏膜组织处切取活检标本，做冷冻切片,或石蜡切片(特殊方法)。2 .将一定浓度的荧光素标记特异性抗体与组织抗原共同孵育，设定适宜的孵育温度和时间，使组织抗原与抗体充分结合。3 .在荧光显微镜下观察，如发现反应部位显示相应荧光，即为阳性反应，根据荧光分布和形态确定抗原部位和性质。【皮肤直接免疫荧光检查的基本改变】1.基底膜荧光(1)系统性红斑狼疮、盘状红斑狼疮、亚急性皮肤型红斑狼疮：基底膜带呈线状、颗粒状或团块状荧光。(2)疱疹样皮炎：真皮乳头内基底膜带颗粒状IgA沉积。类天疱疮、获得性大疱性表皮松解症：线状IgG及C3沉积。(4)线状IgA大疱性皮肤病:基底膜带线状IgA沉积。(5)扁平苔解：真皮乳头层内弥漫性或灶性、球状IgM和C3沉积。2 .表皮细胞间荧光寻常型、红斑型、落叶型、增殖型天疱疮及疱疹样天疱疮等，可见表皮细胞间IgG沉积。3 .血管壁荧光多种血管性皮肤病，如白细胞碎裂性血管炎、结节性多动脉炎等显示管壁及管周荧光。【注意事项】1.原则上，每次实验应该设有阳性和阴性对照。4 .取材部位：在水疱性皮肤病中，应尽量取最早期水疱损害，保持疱的完整性，或取初发的红斑性损害；在红斑狼疮中，取充分发展的皮损处组织；系统性红斑狼疮，亦可取未受累或避光处的皮肤组织，如果为阳性则更有诊断和鉴别诊断价值。5 .标本应及时检查，并且应避光保存，否则荧光会淬灭。二、皮肤间接免疫荧光检查用以检测患者血清中的某种特异抗体或自身抗体。反应中有两对抗原抗体相继发生结合反应，第一抗体与抗原是相对应的特异结合，而第二抗体(即荧光素标记抗体)则是针对第一抗体的抗抗体。【适应证】1 .血清中各种抗微生物抗体的测定，可用于感染性疾病的病原学诊断，如梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等。2 .血清中各种自身抗体的测定，可用于结缔组织病、大庖性皮肤病和其他自身免疫病的诊断。(1)系统性红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病、类风湿关节炎、混合结缔组织病、干燥综合征等:有不同类型的抗核抗体。(2)大疱性皮肤病:如抗天疱疮抗体等。糖尿病:抗胰岛细胞抗体等。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.抽取患者血液，分离出血清。2 .将该血清与含有相关抗原的标本共同孵育，使第一抗体与抗原相结合。3 .加入荧光素标记的第二抗体与抗自身抗体或抗病原体抗体结合，共同孵育。4 .在荧光显微镜下观察标本，如果出现荧光反应即为阳性。【注意事项】1.血清中抗体、第二抗体和抗原的浓度之比应适宜，必要时予以适当稀释。若采用组织抗原标本，则应尽可能暴露该抗原。5 .余同直接免疫荧光检查。三、补体结合法在间接法的基础上发展而成，即在抗原抗体反应时加入补体，再用荧光素标记的抗补体抗体进行示踪。检查妊娠性疱疹患者的自身抗体时，须采用此法。第三节皮肤试验皮肤变应原检测是通过皮肤反应来确定过敏性疾病患者的致敏物质,有助于指导患者预防和治疗过敏性疾病，特别是对明确职业性皮肤病的致病原因具有重要意义。常用的变应原检测方法包括:斑贴试验、划破试验、皮内试验和变应原检测体外试验等。一、斑贴试验斑贴试验(PatChteSt)用于测定迟发型变态反应。【适应证】1.接触性皮炎。6 .职业性皮肤病。7 .化妆品皮炎。8 .湿疹等。【禁忌证】1.皮炎急性期。9 .孕妇。【操作方法及程序】1.受试部位一般取上背部脊柱两侧的正常皮肤。若皮脂过多，可用75%乙醇轻轻擦拭，然后用生理盐水清洗待干。2 .去除斑试器的保护纸，将变应原按顺序置于惰性聚乙烯塑料或铝制斑试器内。排列顺序为自上至下，自左至右，并做标记。3 .将加有变应原的斑试器胶带自上至下贴敷在受试部位，并用手掌轻压，以排除空气。4 .观察结果。于48h去除斑试器，待30mm后观察结果，贴敷后72h再次观察结果，必要时于贴敷后1周进行第3次观察。【结果判定】1 .(-)阴性(无反应)2 .(土可疑阳性(仅有轻度红斑)3 .(+)弱阳性(红斑、浸润、可有少量丘疹)4 .(+)中阳性(红斑、浸润、丘疹、水疱)5 .(+÷)强阳性(红斑、浸润、丘疹、大疱)【注意事项】1.须嘱受试者，如发生强烈剌激反应，应及时去除斑试器。2 .受试前2周和受试期间不要内服皮质类固醉，受试前3d和受试期间应停用抗组胺类药物。3 .受试期间不宜洗澡、饮酒，避免搔抓斑试部位，尽量减少出汗，减少日光照射。4 .应保持斑试器在皮肤上48h,尽量不要过早去除斑试器。受试部位要有标记。贴敷牢固、紧密，避免出现假阴性。5 .应对患者的实际接触致敏物进行斑贴试验。6 .如果在贴敷后72h至贴敷后1周内斑试部位出现红斑、瘙痒等情况，应及时来医院检查。7 .注意区分变态反应与刺激反应，排除假阳性和假阴性。二、划破试验划破试验(SCratChtest)用于测试速发型变态反应。【适应证】1 .各型尊麻疹2 .特应性皮炎3药疹4 .过敏性鼻炎5 .哮喘等【禁忌证】1.高敏体质者6 .有过敏性休克史者【操作方法及程序】1 .一般选择前臂屈侧为受试部位，局部清洁消毒。2 .用消毒的种痘刀或针尖，轻轻划数条长0.3-0.5Cm的划痕，两个受试部位间要有4-5Cm距离，深度以无明显出血为宜。3 .在划痕上滴生理盐水1滴，然后将受试物涂于划痕上，混合均匀，留一划痕仅滴生理盐水，作阴性对照。4 .2Omin后，用消毒蒸储水洗净划痕上受试物，观察反应变化。【结果判定】1 .(-)阴性(无变化，与阴性对照一致)2 .(±)可疑阳性(红斑或风团直径V5rmn,与阴性对照稍有差别)3 .(+)弱阳性(红斑或风团直径=5mm,与阴性对照有明显差别)4 .(+)阳性(红斑或风团直径510mm,并有明显红晕)5 .(+)强阳性(红斑或风团直径10mm,有明显红晕及伪足)【注意事项】1.必须先测定受试者皮肤有无皮肤划痕症。6 .所用的受试物应清洁、无刺激性。7 .结果为阴性时，应继续观察34d。必要时，34周后重复试验。8 .应排除由原发性刺激引起的假阳性反应。9 .应准备肾上腺素注射液，抢救可能发生的过敏性休克。10 受试前2d应停用抗组胺类药物。三、皮内试验皮内试验(intracutaneoustest)主要用于测试速发型变态反应。原理同划破试验，反应结果较划破试验阳性率高，较准确，但偶可发生过敏性休克。【适应证】1.各型尊麻疹。11 特应性皮炎。12 药疹。13 过敏性鼻炎、哮喘等。【禁忌证】1.高敏体质者。2.有过敏性休克史者。3.5岁以下儿童。【操作方法及步骤】1.一般选择前臂屈侧为受试部位，局部清洁消毒。2 .将欲试抗原以无菌生理盐水适当稀释，以皮试注射器分别吸取0Im1.注射于受试部位皮内。同时注射多种抗原时，应在注射部位做标记。3 .另取一注射器吸取0.Im1.无菌生理盐水，注射于对侧前臂屈侧相应注射部位，或同臂原注射部位的下方45cm处，作为阴性对照。4 .注射后20-30min观察速发型反应2448h后观察迟发型反应，必要时连续观察1周。【结果判定】1.速发型反应注射后2030min,局部出现直径11.5cm的红斑或风团为阳性。5 .迟发型反应注射后开始出现红斑或凤团，至24h达最高峰，或24-48h或更长时间后开始出现此种反应。麻风菌素的迟发反应可达21do6 .阴性反应局部无变化，与阴性对照一致。【注意事项】1.若出现过敏性休克，应立即皮下注射0.1%肾上腺素0.5m1.立即吸氧，静滴皮质类固醇，并根据情况采取其他急救措施。2 .阴性对照处应无变化，否则应重做。若结果为阴性而有可疑者，可增加欲试抗原浓度，重复试验。3 .观察结果时，应注意假阳性及假阴性反应。四、挥发性变应原（空气播散）试验用于检测挥发性变应原。【适应证】漆性皮炎等【操作方法及步骤】1.将受试物质的原液或稀释于不同浓度挥发性溶媒中的稀释液，盛于小瓶或试管中。2 .试验时用管口或瓶口接触受试者皮肤，以胶布固定。3 .经过IOS20min去除小瓶或试管，观察结果。【结果判定】1.阳性反应受试处皮肤有红肿现象。4 .阴性反应受试处皮肤无明显变化。【注意事项】1.避免受试液沾染皮肤。5 .观察结果时，应注意假阳性及假阴性反应。6 .应注意由原发性刺激引起的假阳性反应。五、变应原检测体外试验于体外对人血清或血浆中的变应原特异性IgE抗体进行定性检测，较上述在体试验安全、痛苦小、特异性高、操作简便。可通过放射性免疫吸附法、酶免疫分析法和金标法检测受试者血液中的特异性IgE抗体。【适应证】1.各型尊麻疹。7 .特应性皮炎。8 .药疹。9 .过敏性鼻炎。10 哮喘等。【操作方法及步骤】1.标本的收集和预处理取静脉血，分离血清或血浆。11 严格按照所选用试剂盒说明书的步骤进行加样、反应和显色。12 根据显色的速度和强度观察结果。【结果判定】颜色从浅到深的变化速度与颜色的深度和患者血清标本中IgE抗体或免疫球蛋白的滴度成比例。1.强变态反应在5min内很快出现较深的颜色。2 .弱变态反应出现颜色变化的时间5min03 .阴性反应颜色同阴性对照。【注意事项】1.不能使用大量溶血和严重高血脂的血液标木。避免标本中有颗粒性物质。4 .不能凭任何单个实验结果作出最终临床诊断，只有临床医师在所有的临床特征和实验结果的基础上才能作出最后的诊断。5 .患者摄人胆固醇后可影响血清抗体的测定水平。6 .寄生虫病患者可产生IgE抗体，使血清中的滴度升高，出现假阳性。7 .本试验为筛选试验，阴性结果并不能排除受试者对其他变应原的敏感性。第四节玻片压诊法【适应证】1.区别毛细血管扩张、炎性红斑、血管瘤与皮下出血。寻常狼疮。8 .区别色素脱失斑与贫血痣。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.将玻片用力压在皮疹上10-20So2.观察受压皮疹。(1)毛细血管扩张、炎性红斑或血管瘤压诊后消失，而皮下出血不变。寻常狼疮结节压诊后呈苹果酱颜色。(3)贫血痣压诊后白斑消失，而色素脱失斑不变。第五节皮肤划痕试验【适应证】1.尊麻疹。2 .皮肤划痕症。3 .痒疹等。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.用钝器用力划过皮肤。2.观察划过处皮肤反应，出现三联反应者为阳性。(1)第一反应i划后15s,划过处产生红色线条。(2)第二反应:划后30s,红色线条两侧发生红斑。(3)第三反应:划后1.3min,划过处发生隆起，苍白色的条状风团。第六节皮肤紫外线最小红斑量测定最小红斑量(minima1.erythema1.dose,MED)测定指能产生肉眼所见最弱红斑所需要的紫外线照射时间或剂量，它有助于了解皮肤对所接受的紫外线的敏感程度。【适应证】1.对紫外线敏感的皮肤病患者，如光敏性皮炎、多形性日光疹、慢性光化性皮炎等。2.了解皮肤对日光照晒的耐受程度，以选用合适的防晒护肤制剂，测定闩光保护指数(SPF)值。【禁忌证】不合作或不能进行者。【操作方法及程序】1.光砰高压汞灯、金属卤素灯和荧光灯管灯。发射光源应以中波紫外线(290320nm)为主峰，功率500W。2 .照射部位应在非曝光区域皮肤照射，如背部、前胸或前臂屈侧，事先准备好一块具有6个长方形小孔格的布，孔格约0.8CmX1.5cm,间距约0.8cm。3 .照射方法灯源垂直于实验区皮肤，相距约25cm,把具有6个小孔格的布平整铺在照射部位皮肤上并固定好，按阶梯式递增的时间或剂量照射各孔，照射最短时间一般为15so4 .结果判断照射后24h在充足的自然光线下观察，以肉眼所见与孔格一致、轮廓清楚、色泽均匀的最弱红斑所需的照射时间或剂量为最小红斑量。【注意事项】1.最小红斑量随个体差异、皮肤色泽、照射部位、试验季节及光源的光谱和强度等不同有较多差异，临床上应以正常人数据为对照。2 .对紫外线敏感的程度差异较大，异常敏感者照射时间较长皮肤上会出现红肿，甚至水疱，或可遗留色素沉着，经处理后会逐渐恢复正常。第七节滤过紫外线检查【适应证】1.头癣。3 .花斑癣。4 .细菌性皮肤病如红癣等。5 .色素性皮肤病。6 .吓咻类物质的检查等。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .在紫外线灯上装上一种含氧化银的紫色石英玻璃，获得320八40Onm的长波紫外线。2 .在暗室中用这种光线照射某些皮肤病患者的头发、皮损等处，可以产生特殊的荧光，有助于这些皮肤病的诊断和治疗。【结果判定】1.头癣的诊断与疗效观察黄癣呈暗绿色荧光，白癣呈亮绿色荧光，黑点癣无荧光。治疗后病发荧光消失。某些无症状头癣患者可出现阳性荧光反应。3 .花斑癣的诊断呈黄棕色荧光。4 .细菌性皮肤病的诊断红癣呈珊瑚红色荧光；腋毛癣呈暗绿色荧光。5 .色素性皮肤病的诊断白瘫风边界清楚，可与其他色素减退斑相区别。6 .口卜咻类物质的检查吓咻类物质可呈淡红色、红色或橙红色荧光。【注意事项】1.避免用该灯照射患者眼部。2.头癣患者检查前3d最好停用外用药，以免误诊。第八节真菌检查一、真菌直接镜检是一种方便、准确诊断真菌病的检测方法。此法简便易行，阳性可明确真菌是否存在，结合临床表现可确诊皮肤真菌病，但一般不能确定致病菌种类，而且阴性不能完全排除真菌病诊断。【适应证】各种浅部、深部真菌病。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.用钝刀刮取皮损边缘部的皮屑，或用小刀刮取变色松脆的甲屑，用拔毛镶拔取病发，置载玻片上，加1滴10%的KOH溶液，盖上盖玻片后在酒精灯上微微加热，待榇本溶解，轻轻加压盖玻片使标本透明，然后在显微镜下观察。2 .检查时应遮去强光，先在低倍镜下观察有无真菌菌丝和抱子，然后用高倍镜观察抱子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。3 .典型真菌镜检所见(1)花斑癣：短粗、两头钝圆、稍弯曲的菌丝，成堆的圆形或卵圆形厚壁抱子，有时有芽胞。(2)头癣黄癣：黄癣痂，发内抱子、鹿角状菌丝，可见气沟、气泡。白癣：断发外菌鞘由镶嵌或成堆圆形抱子组成。黑癣:发内链状抱子。(3)体股癣、手足癣：分支分隔的长菌丝。(4)甲癣：分支分隔的长菌丝，常断裂为关节袍子样。(5)念珠菌病，假菌丝、圆形或椭圆形芽胞。(6)隐球菌病：圆形或椭圆形双壁抱子，外围有一层透光荚膜，在黑色背景下极为明亮。(7)着色芽生菌病:棕色圆形厚壁分隔抱子。(8)暗色丝袍霉病，棕色分支分隔菌丝或酵母样细胞。(9)链状芽生菌病:链状出芽把子。(10)毛霉病:宽大菌丝，不分隔。【注意事项】1.取材应在损害活动区，如环形损害的边缘、水庖顶部，量要充足。2 .体液标本应离心后取沉渣镜检。有条件者应同时进行真菌培养。3 .取材前皮损部位应尽量避免涂药。二、真菌培养目的是进一步提高病原体检出的阳性率，同时确定致病菌的种类，一旦发现肯定的致病菌如红色毛癣菌或新型隐球菌时，诊断即可确立。但如果分离出条件致病菌如白色念珠菌或烟曲霉时，应结合临庞进行判断。从无菌部位如血液或脑脊液中分离出条件致病菌常提示肯定的感染，但对来自于脓、痰或尿的标本则应谨慎解释结果，单靠一次培养阳性往往不能确定诊断、有时还须结合直接镜检的结果，因此强调直接镜检与培养检查相结合的重要性。【适应证】1.疑似真菌感染的标本。4 .进一步确定感染真菌种类。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.在无菌操作下，将标本接种于沙氏葡萄糖琼脂(SDA),置2527摄氏度温箱内培养46周。2 .如怀疑有深部真菌，应同时在3537摄氏度培养。3 .菌落出现后，应定期观察其生长情况。4 .常规分离鉴定使用的培养基为SDA斜面培养基，加0.005%氯霉素，对皮肤癣菌，还应添加0.05%放线菌酮。5 .对分离到的真菌，应结合菌落和显微镜下形态学特点将其鉴定到种。真菌常用形态学鉴定，而酵母常以形态学和生理生化学方法结合进行鉴定。6.常见真菌培养所见:念珠菌病:奶油色酵母样菌落(2)隐球菌病：乳白色酵母样菌落，而后为浅橘黄色，质地呈黏液状。胞子丝菌病:棕色至棕黑色菌落。(4)曲霉病:黄绿色毛状菌落。(5)芽生菌病：真菌相为白色棉花样菌落，酵母相为奶油色或棕色菌落。(6)暗色丝狗霉病:棕黑色菌落。(7)诺卡菌病:橘黄色或红色菌落，有泥土气味。【注意事项】1.应与直接镜检结果综合进行判断。2 .严格无菌操作，避免污染。3 .提倡多管(点)、多次培养，确保结果可信性。第九节疥蛾检查【适应证】疥疮。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.隧道墨汁试验以蓝墨水滴在可疑有隧道处，用棉签轻揉3OsS1.min,再用酒精棉球擦去表面墨迹，观察是否有蓝墨水渗人隧道的蓝色痕迹，间接证明疥蛾的存在。2 .针挑法此法常用。选取疥疮疹或隧道末端(盲端)，用6号注射针头，针口斜面向上，从其侧旁刺入，并从底部绕过虫体，将针口稍加转动，疥虫可落入针口内，之后轻轻挑破皮肤，出针检查疥虫。3 .皮肤刮片法适用于新鲜的炎性丘疹。先在皮损上放置少量液状石蜡(石蜡油，也可在消毒的手术刀片上沾少许液状石蜡)，用消毒手术刀片在丘疹上平刮6下，刮取丘疹顶部的角层部分，直至有细小出血点为度，将刮取物移至载玻片上，显微镜下可见疥虫、虫卵或虫屎。【结果判定】1 .在良好的光线下，活疥虫用肉眼仅可见针头大小的灰白色小点，能活动。2 .将疥虫移至有油的载玻片上，低倍显微镜下即可见疥虫。3 .如虫体被挑破，可见其中一部分。有时见椭圆形虫卵或虫屎。【注意事项】1.查见疥虫是诊断疥疮的有力证据，查见虫卵或虫屎也可作出诊断。一些时间较长的、继发感染的或者湿疹化的疥疮查不到疥虫，根据传播和流行情况、接触史、典型的临床症状也可作出疥疮诊断。4 .检查时应注意选择完整的未经搔抓的早期新鲜的丘疱疹或隧道(末端)，阳性率较高。反复搔抓、挤压、感染、肿胀、湿疹化等均可破坏虫体，影响检查结果。5 .阴性也不能完全排除疥疮的诊断。第十节蠕形蛾检查【适应证】酒渣鼻等。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.挤刮法(1)选取鼻沟、颊部及颔部等皮损区，用刮刀或手挤压。(2)挤出物置于玻片上，加一滴生理盐水或50%甘油，盖上盖玻片，并轻轻压平。(3)镜检。2.透明胶带法(1)取透明胶带贴于鼻沟、颊部及颔部等皮损区。(2)数小时或过夜后，取下胶带贴f载玻片上，镜检。【注意事项】1.挤刮法应避开皮损合并严重感染灶处。2.透明胶带法对胶带过敏者、面部有急性炎症者等慎用。第十一节阴虱检查【适应证】阴虱病。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.用细密的篦子将阴毛上的阴虱梳下，或用小镣子直接取下阴虱，或用眼科剪剪下黏附有阴虱或阴虱卵的阴毛。2.将上述标本置于载玻片上，加一滴10%KOH,在酒精灯上微加热后，于显微镜下检查，寻找阴虱或阴虱卵。阴虱呈蟹形，有3对足，前足较小，中后组足巨大，有粗大爪抓住阴毛。阴虱卵为铁锈色或淡红色楠圆形小粒，常斜向附贴在阴毛上，在显微镜下可见到卵体。【注意事项】1.由于阴虱和阴虱卵常贴附于阴毛的近根部，因此在采集阴毛标本时应在毛干根部采集，2.阴性也不能完全排除阴虱病的诊断。第十二节麻风杆菌及麻风相关检查一、皮肤切刮涂片检查【适应证】麻风病【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .皮肤取材法取材部位皮肤经碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，左手捏紧皮肤，使之缺血，右手持消毒的11号手术刀切长约5mm,深23mm切口。(2)以刀尖来回3-4次刮取切口边缘和底部组织液，在刀尖上见到少量组织液时，立即涂抹在干净载玻片上成直径57mm圆形涂膜。(3)面部切口创面仅用消毒棉球止血5min,肢体部位可加胶布固定或用创可贴止血。皮肤取材部位一般取46处，常规部位为左右眶上、左右耳垂加两处皮损，皮损应取病情最活动处。（5）取材完毕后，涂片在火焰上烘干固定，送实验室染色镜检。2 .染色方法染色时可用加温法或不加温法，加温法用时较短。（1）加温法将已固定的载玻片放在染色架上，滴加苯酚复红染液覆盖整个涂膜，用酒精灯在载玻片背面加温15min,以染液勿沸腾为度，载玻片上染液干涸时要随时添加染液。倾去苯酚复红染液，用自来水从载玻片的一端轻轻冲洗（勿直接冲洗涂膜再加1%盐酸乙醉作用1530s,轻轻晃动载玻片使之脱色。如涂膜较厚，脱色时间可稍延长，待涂膜呈淡红色为度。在玻片上加0.3%亚甲蓝（美蓝）染液3060s,用自来水从载玻片的一端轻轻冲洗。待载玻片干后镜检。亚甲蓝复染的时间应视涂膜的厚薄而定。涂膜厚时染色时间应短，防止背景过深，镜检时视野透光不良，难以检出红染的抗酸杆菌而影响镜检结果。应使涂膜的背景为浅蓝色为宜。（2）不加温法在室温条件下，在第一步染色中，滴加苯酚复红染液30min,无须加温，余染色步骤与加温法同。不加温法染色，染色条件和结果都比较稳定，值得提倡。理想的染片，应该是背景浅蓝色，在一个油镜视野内有数个炎症细胞，提示组织液取材符合真皮深度，抗酸杆菌呈现鲜红色。3 .细菌密度标准计算RidIey推荐的一种10倍分级法，可大体反映皮损内细菌密度，在现场防治和科研中被广泛应用。阴性:检查100个以上油镜视野未查到菌。1十：平均IOO个视野查到ISIO条菌。2十：平均10个视野查到110条菌。3十：平均每个视野查到IS1.O条菌。4十：平均每个视野查到IOS1.oO条菌。5十：平均每个视野查到100-1000条菌。6十：平均每个视野查到IooO条以上菌。4 .细菌密度指数(BI)的计算B1.=各涂膜细菌密度(+)数的总和/涂膜数【注意事项】1.取材部位要选取活动性皮损，如结节、斑块、红斑、弥漫性浸润等。5 .取材的深度一定要够，一般为23mm,要捏紧皮损，防止出血，刀尖要确认刮到组织液后再涂片。因取材深度不够而取组织液太少，不能形成符合规定的涂膜是产生查菌假阴性的主要原因。6 .组织液取材勿含血液，否则会影响镜检结果，也是出现查菌假阴性的主要原因。7 .抗酸染液一定要新鲜配制，一般勿超过1年。麻风诊断中已经有因染液过期出现查菌假阴性而漏诊的情况。8 .染色要按规定操作方法进行，要根据涂膜的厚薄调整染色的时间。涂膜太厚，亚甲蓝染色时间太长是涂片蓝色背景太深而出现假阴性结果的常见原因。9 .完整菌指菌体完整、染色均匀的正常形、超过1/2的短杆形及延仲形细菌。非完整菌为菌体断裂、染色不均匀的颗粒形、小于1/2的断裂形、双球形、念珠形等。10 细菌形态对判断麻风早期疗效和复发很有用，在疑似复发的患者的涂片中见到较多的完整菌，则基本可确定麻风复发。经过有效治疗的患者，麻风菌均呈现颗粒状，无完整菌存在。二、组胺试验【适应证】麻风病。【禁忌证】对所试药物高度过敏者。【操作方法及程序】1.用碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，在正常和麻风皮损处分别皮内注射1：1OOO的磷酸组胺溶液各0.Im1.11 约30s后，于正常皮肤注射处周围出现第一个红斑，直径约IOmm；再过30s,在上述红斑周围出现第二个红斑，直径30-40mm,边缘弥漫；最后在红斑中央出现风团a此为完整的三联反应。表明受试皮肤的神经功能正常。12 三联反应的原理是最初出现的红斑是皮肤毛细血管受组胺刺激而扩张所致，最后出现的风团是继毛细血管扩张后，血浆渗出引起的局部水肿。重要的是第二个红斑，是小动脉扩张所致。由于小动脉扩张的前提是支配其血管的末梢神经要正常，并能通过轴突反射而传导冲动才能完成，因此特别有意义。在神经切断，或用普鲁卡因封闭神经后，就不会有第二个红斑。麻风患者由于皮损处末梢神经受到破坏，所支配的小动脉不能扩张，也不出现第二个红斑，称三联反应不完整。【注意事项】1.在炎性红斑处不宜做此试验，以免判断失误。13 组胺三联反应的不完整，不是麻风病所特有的，许多周围神经病变都町出现。14 皮损处的改变要与正常皮肤处对照观察。三、出汗试验【适应证】麻风病。【禁忌证】对所试药物高度过敏者。【操作方法及程序】1.淀粉法(1)在正常皮肤和皮损处用碘酒和75%乙醇消毒后，再各涂碘酒，待干后，分别皮内注射1:1000的毛果芸香碱溶液各0.1m1.,擦干针尖处渗液，立即撒上薄层干燥淀粉。(2)35min后，正常皮肤部位淀粉处出现蓝色小点或小片，表示出汗正常。(3)如果皮损处汗腺破坏或泌汗神经破坏，泌汗功能障碍，则碘无法与淀粉发生作用，不出现蓝点或蓝色小片。15 试纸法(1)皮内注射毛果芸香碱后，用棉球擦去针眼处渗液，2mm后，将澳酚蓝纸按在针眼处，轻轻加压，15s后将纸取下，如有出汗则在溟酚蓝纸上显示针尖或稍大的蓝色小点。(2)此法的试验结果比较精确(3)溟酚蓝纸的制备。取溟酚蓝OIg溶于95%乙醇溶液Iom1.内配成1%澳酚蓝溶液；用滴管将1%澳酚蓝溶液滴在滤纸上，待自然干燥后成黄色的滤纸，剪成IcmX1.cm大小备用。【注意事项】宜在对侧相应或邻近的正常皮肤处作对照，皮损处的变化要与正常皮肤处仔细观察对比。四、立毛肌试验【适应证】麻风病。【禁忌证】对所试药物高度过敏者。【操作方法及程序】1.在正常和皮损处先以碘酒和75%乙醇消毒后，分别于皮内注射1:10万的苦味酸烟碱溶液0.Im1.2 .正常皮肤的末梢神经未受损害，立毛肌会收缩，引起鸡皮现象。3 .麻风皮损因神经末梢受到破坏而无此现象。【注意事项】1.立毛肌试验时没有鸡皮现象不是麻风皮损所特有的，也见于所有末梢神经功能在受到阻断或损伤的情况下。2 .宜在对侧相应或邻近的正常皮肤处作对照，皮损处的变化要与正常皮肤处仔细观察对比。第十三节淋球菌检查【适应证】淋病。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.分泌物的涂片检查主要适用于男性。用灭菌生理盐水洗净尿道口。(2)戴消毒手套后，用手指由阴茎根部向尿道口方向挤出脓液，用接种环或棉拭子蘸取脓液，轻轻涂于载玻片上，待其自然干燥后加热固定，做革兰染色，然后镜检。(3)在多形核白细胞内找到革兰阴性的肾形双球菌时，可明确诊断。3 .淋球菌的分离培养取材。男性患者从尿道取材时，可用细小棉拭子伸人尿道2-4cm,轻轻转动后取出分泌物(应略带黏膜。 女性患者取材时，先用阴道窥器暴露宫颈口，用无菌棉拭子拭去宫颈口表面的分泌物，另取一棉拭子插入宫颈口内1.2cm,转动并停留1020s取出。 直肠取材时，应将棉拭子插入肛门。检查淋球菌性咽炎时，应从扁桃体及扁桃体窝取材。对青春期前女童可采集阴道处分泌物标本。(2)标本取出后立即接种于培养基中，目前常用加入多黏菌素的血液琼脂或巧克力琼脂培养基。(3)初次分离应使用5%10%CO2烛缸，培养温度以36C为宜，相对湿度80%以上，培养2448h看结果。(4)淋球菌在多黏菌素B血液琼脂上经2448h培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色的菌落，边缘呈花瓣状，直径0.51.0cm,用接种环触之有黏性，如继续培养，菌落体积增大，表面粗糙，边缘皱缩。3.淋球菌的鉴定一一氧化酶试验(1)配制氧化酶试剂：05%1%盐酸二甲基对苯二胺水溶液。(2)将溶液滴加于可疑菌落上，观察颜色变化。也可先将试剂滴在一小张滤纸片上，然后挑取可疑菌落与之接触，观察颜色变化。(3)菌落在接触氧化酶试剂152Os出现红色，保持3Os以上，然后逐渐变成紫色，最后呈黑色，为氧化酶试验阳性，证实为淋球菌。【注意事项】1.分泌物涂片时不要用力涂擦，以免细胞破裂和变形，涂片厚薄要合适。2 .女性宫颈分泌物、咽和直肠标本在涂片中由于杂菌较多，故推荐用培养法。3 .分离培养取材时拭子伸入尿道或宫颈的深度一定要足够。4 .培养淋球菌时，取材后应立即接种，标本离体的时间越短越好。5 .分离培养应采用加抗生素的选择性培养基。6 .氧化酶试剂应为新鲜配制(现用现配)，在棕色瓶中避光保存。7 .氧化酶试剂遇铁也会变红，故接种环应非铁丝所制。8 .对症状不典型的男性患者取材，最好在其晨起排尿前或排尿4h以后。第十四节衣原体检查【适应证】非淋球菌感染者。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.直接涂片染色法采集标本同淋球菌。(2标本涂片，自然干燥后甲醛固定1015min.(3)当日配制的姬姆萨溶液染色Iho(4)再用95%乙醇溶液淋洗涂片，干燥。(5)油镜下阳性标本中可在上皮细胞内找到1-3个或更多呈蓝色、深蓝色或暗紫色的包涵体。2 .衣原体抗原检测法采集标本同淋球菌。(2)用商品试剂盒检测，检测前先将试剂盒和测试卡等室温下复温30mino(3)加试剂至塑料管刻度处(约0.6m1.),将拭子标本浸人管内摇匀，置水浴，1020min取出，转动拭子并沿管壁挤压，弃去拭子，提取液置室温冷却后盖上管盖。(4)将测试卡置台面，加入5滴提取液于检体窗，静置30min后观察结果。(5)质控窗和结果窗均显示一条蓝带为阳性，结果窗无变化为阴性。3 .免疫荧光法采集标本同淋球菌检查。(2)将标本涂于玻片凹孔中或圈I圈中，自然干燥，丙酮或无水甲醛固定漂洗，再干燥。(3)加3OmI荧光素标记的沙眼衣原体单克隆抗体试剂覆盖凹孔，玻片置湿盒中或37摄氏度下作用15min,去掉多余试剂，用蒸储水淋洗涂片，自然干燥，加一滴封固液，盖上盖玻片，置荧光显微镜下检查。(4)阳性标本在高倍镜下可见上皮细胞内的衣原体颗粒，为单一、针尖大小、明亮的绿色荧光，在油镜下为荧光均匀、边缘光滑的圆盘样结构，也可见网状体等其他形态的衣原体颗粒。【注意事项】同淋球菌检查。第十五节解服服原体检查【适应证】非淋球菌感染者。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.采集标本同淋球菌检查，也可用IOm1.中段尿离心(2000rmin,IOmin),取沉渣作接种物。4 .将标本接种到液体培养基中置烛缸内，在37C恒温箱内培养24