ELISA检测.docx

E1.ISA检测一-固相捕获法测IgM抗体在病原侬急性感ft的诊断中，通材需桧测IgM抗体，如急性甲理肝炎诊惭的血清抗HAVIgM桧测.颊性乙硼炎病毒腐0的血清抗HBcIgM检测和TORCH项目的系列I9M检测等.IgM抗体也石使用间按法测定的，如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒.在使用间接S!IgM抗体时,由于血床血清样本中含有高浓度的IgG抗体,其中SJ分符异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合,从而干扰IgM抗体的检测.因此,在使用间接法测定IgM抗体时，通瞒将血清样本用杭人IgG抗体或SPA预处理,以去照IgG的干扰.这样不但测定较为警琐,而且影对S!定的特异性和灵8M5.目前，常用的IgM抗体检冽方法为撕法，即以阮人IgM抗体新人UtS）作为同相抗体，当加入心湾标楠，具中的IgM美抗南特异的和非特异的）国可被固相抗体网联,再加入特异抗（R.其与固相上漏映的IgM抗体结合后，加入第标抗特异抗原的抗体，最后S1.1.入底物显色.具体操作步物口下：1 .首先将抗人IgMbt链抗体于嫉酸部缓冲法中40c下过夜包褴莪基乙熔等固相,形成固相抗体.洗砂去除未与3!相结合或结合不堪的抗体后,用小牛血清或牛血清白馔白等封闭，洗澎去除未结合的郃分及永思.2 .加入含待测IgM抗体的临床”本如血清等，沮育一定时间后洗板；此时,特测林本中的JgM抗体就会与回相上的抗P梃抗体反应而IR对于回相上.3 .JQ入特异的抗原如HAV抗风HBcAg等,混音一定时问后洗板：ItW.特异抗原就会与固相上的特身IgM抗体发生反应.4加入SB标记的杭特异抗原的抗依,温声一定时间后洗板，此时,在固相上即膨成相应的杭原抗体发合物.5 .加入第鹿IS.湿白显色观定本方法受事但建的是RF（IgM类）及其忸E特异IgM的干扰，RF（1.gM类）由于其微与固相抗人U链抗体结合,并可与SS后SO入的6标抗体（动物IgG）反应，从而导致俯阳性反65.而非椅异】gM由于其在第一步温育中，可与转身IgM克令与固相抗体结合,所以会影响测定的灵敏度.因此，使用本法测IgM,必须对临床格本进行适当稀释.样本椽释石,上述产生干扰作用的非特片IgM含量值少,而特异IgM由于处于相应病原体的急性源壮圉,淘度很高.一定醍译后，不会有明显影响.况且,在某些病原侬如HBV的慢性感蜩段,IgM类特斤抗体也胞持续存在.只不过满度要低很多.因此，如不对血清样本稀释,就直接检测，即使品没有亚特异IgM的干扰,阳性测定结果也没有急性M染的诊断价伯.现在.有些成剂生产厂家,为了迎合临床实验空减轻劳动强度、筒便操作的受求，生产了不需对样本进行斶集的抗HAV1.gM和抗,HBdgMEUSA试剂食，现有不少实验室也在使用.避于上面提9!的原因，我IiiaW施床实验室在做抗HAV1.gMIff1.aHBcIgM等类啦J1.B1.应使用对样本进行稀性的试剂金,以保证检测的临床价假.酹联免疫吸附测定E1.ISA结果判定的常用缩写EUSA测定按其式示测定t三宋的方式分为定性和定测定两大类.定性测定只是对根本中是否含有待iW3曲三出育或允凌6.糊用IStr和W粗豕可见定性测定通常是用于传爱性痛原体的抗原或抗体的测定，以判斯特定病原达旃染的存在与否.而定量测定期息对标本中待测沆原的多少进行值测定，以日体敢0表示.定测定2S本上是用于蓑病尿体抗晾物质的测定,如激索.细胞因子.舲痛标芯物.小分子为期等.目前国内应用的EUSA试剂盒绝大郃分是用于传发性病原体的班晾或抗体的定性测定,也有少部分用于.FP.hCG.SM烟射例S*a定EUSA钿版的舱和阳性.修员依Iga蝴J渊淀的IBtIy蛇伯（CUt-Off）.定量史定的«1”依据是试剂金中所带标准病同时测定得出的笊及反应曲域又将:标准西域）.实物室进行室内质的使用.下面再解程一下在EUSA定性测定i三果列定中JS用的一些够写:（I）S/C0:其中S为SamPJe（样本）或SPeqmen（标本就前与，去示的越琬!定的CK光阂B,CO为cut-off值的简片.除克安丽法外,其他EUSA定性测定模式中，当S/C。值大于或等于1时，标本的测定为阳性，小于1时为阴性.S/N或P/N:其中SH（I）.N为negat>ve（闪性对脚的简耳,P为Patient便？5）的简写.姣乐的试剂盒很多都使用S/NPN>2.1为阳性判定标准,现仍有一些试制盒使用这种方式.这冲方11SCO方或无根本性区别，只不过是前吉将性时照（N）的2.1倍机为cut-off值而已.酶免疫试验的优点及局限性而免疫试验之所以能成为崎乐免疫检验中的主导技术,是与它的方法上的特异性和灵敏性、淡作上的简便性以及位剂的物定住分不开的,还有很IB要的一点是，其对环境没存污染减胁.尽管如此，作为一项免疫检验技木.酹免疫试验还是有具月限性的,不但所珍测的生物学体液样本如Jiiai中有可能存在各种干扰实验的因素,而且在实检过程中，影哨结果的因素也很妥,尤其是迸行手工的E1.1.SA测定时.It外,在定性EUSA碘中,18性列定伯（CUT-OFF）的建立，是在一定的统计学视上的，相对于S5个具体的受险者来说,具有可能并不具备正确性.例如,使用EUSA方法检测抗HCV及抗HIV或HBsAg,有时慢,检刑所得的槌结也许并不是真正的阳性,而需要使用具妫方法如近组免疫印边（recombinantimmur>obotas-say,RIBA）.Hi白a¾HWeSternb1.t,WB）aa33mi,报告阳性.这里抗HCV和抗H1.V的恰测均使用病毒部分的三t因工用抗黑,耳他一芸病击如流感病毒.饵照炎病期和水位病毒等JB染人体Jg,亦或一些自身抗体，也有可墟会导致假Ia性反应.HBsAg的测定主要是弱汨性的叵翅,这与E1.1.SA3U定的,茨区有关系,处于cut-off伯冏国亦即灰区”的t三果的可霞性通常姣差,阳性当然需要增认,用性却也未必是真,这一点在血站筛检献血员血液时是等常H要的,必须引起注意,并采取适当的搭地,昉止此类产血即明人们般/的传条性疾病坦IfiUHSff1.，本书后面的有关承汪会对此何通做详烟论述.ft5t,免疫测定的基碇是抗摩抗体的特异反应，因此，KI检测抗原，娘了要求抗体（单抗或色抗）足特片的9卜，还姿求待测抗原上必负存在有能与所用抗达结合的抗原决定篌,如果因为IS因突变导致某些位点的不安达,或者结合位点因为某些原因被封闭或眼断,都会影响抗体与抗原的结合,造成假阴性结果.如桧测抗侬,则要求所用包被抗原应尽可能包含所有的结鼠抗原决定垓,同时又尽可能不含有非特异的成分，这一点往往由于技术水平的Ig制而雉以完全做1.因此，从某种雳义上来说，假阳性钝明性是不娓完全i免的,尽管通过努力,可以将耳碍至很低的K度,这也是津立临床免疫情5方法所努力的方向.酶联免疫吸附测定操作要点1标本的采取和保存可用作EuSA测定的标本十分广泛,体液（如血清）.分泌物（呻液）和辟；!?糊（如尿液.箕使）等均可作标本以测定国中某种抗体或抗原成份.有些标本可育芨迸行测定（如血清.屎液），ww霖经预处理（如JS便和某些分诊软）.大部分E1.1.SA检测均以血清为标本.血浆中除尚含有纤堆蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清.制备血浆场本需18助于抗茶剂，而血清标本只受持JIi酒自然朦包、血块收姐后即可取得.除晒情况外，在医学校验中均以H1.滑作为检测标本.在EUsA中Iii旅和山清可同等应用.血清标本可技常规方法采荣,应注费避免溶血,红细胞溶解时会林放出具有过氧化物演活性的曲质,以HRP为标记的E1.1.SA测定中,溶J1.1.标本可能会审加非特用性M色.血清标本宜除鲜时检观.如有细的污Jft,Jfi体中可榜含有内源性HRP.也会产生低阳性反应.如在泳箱中保存过久,具中的可发生K合.在间接法E1.1.SA中可使本底加深.一般说来,在5天内测定的m湾标本可放（于4c,超过一阊测定的需低温冰存.苏结m清电解后，暖白质均郃浓缩,分布不均，应充分混匀宜注爆.送免气泡,可上下I1.f倒混和,不荽在泯匀器上强烈髭38.混卷或有沉淀的皮酒标本应先SB心或过送.渡清后再检9J.反复东除会使抗体效价跌落,所以3J抗体的血清标本如霹保存作多次校测,宜少量分装添存.保存血清门采建时就应注患无药漫作，也可加入适当防焉剂.2试剂的准笛按试剂盒说明书的姿求准组实验中需用的试剂.E1.1.SA中用的蒸!S水或去离子水，包括用于洗涕的，应为新鲜的和高质的.自SS的燃冲液应用PH计测校正.从泳箱中取出的试验用试剂应待i三度与室温平衡后使用.试剂盒中本次试验不需用的部分应及时颇海箱保存.3加样在EUSA中TK有3次加W步聚，即加标本，结合物，加底J.加W时JS将所加胡加在IEtSA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注息不可泻出,不可产生气泡.加标本一股用循量加样JS,按规定的加入板孔中.每次加标本位更接吸聘,以免发生交叉污尖,也可用一次性的定量28料管加样.有此测定（如同发法EuSA）需用桶烽的Ui清，可在试隹中按现定的稀释度稀释石再加样.也可在坂孔中加入照春液，再在其中In入血清蜥本，然后在微型意建浮上H建1分钟以保证泡和.加曲结合布应用JS和底初应用液时可用定多Iam液羽.使加液过程迅速完位.4保温在E1.1.SA中一般有沏次抗原抗内反应，即加标本和SCeJ结合翁后.抗原抗体反JS的完成需要有一定的温度和时间，这一枳源过程称为温育（incubation）,有人称之为簿中,在EUSA中似不恰当.E1.1.SA厘固相兔5测定，抗原.抗体的结合只在固也表面上发生.以抗体包根的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗感并不是都有均等的和团相抗t2合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原苴接与抗体接触.这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩脓才筋达到反应的终点.在具后加入的88标记抗俵与固相抗余的结合也同样K1.比.这就是为什么E1.1.SA反应矽JB需要一定时间的混U.退之常采用的温度有43C.37X.交温14C（泳箱温度）等.37PJB实验室中常用的保温if1.度，也是大多数优（R抗体t三合的合适退度.在建立EUSA方法作反应动力学研究时,文检哀明，两次抗原抗体反应一般在37式经1.2小时,产物的生成可达顶修.为SO速反应,可提高反应的温度,有些试验在43t迸行，但不同来用更商的涉度.杭勒抗体反应4P更为彻底,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜,以形成最多的沉淀.也因所需时间太长,在E1.EA中一股不予采用.保温的方式序有的EUSA仪器网有符制的电热焕外,一般均采用水浴,可将EUSA板置于水浴箱中，E1.1.SA痴蛔贴餐水面，使温度迅速平衡.为避免然发，sisi11as,也可用徵科贴封纸或供暂睽!8篮板孔，此时可让反应权尊浮在水面上.先用保阻箱，EUSA板应放在湿盒内.湿食要选用传热性良好的材料如金属等,在盆底翊的炒布,最后将E1.1.SA板放在湿沙布上.湿盘应先放在保温箱中预温至规定的i三度,特别是在气遢竣低的时候更应如此.无论是水浴还是湿食温可,反应板均不宜鼓放,以保证各板的温度都能迅谦平衡.室温温育的反应,操作时的室温应严格聚制在坝定的JS国内，标准左遢沮度是指20-25C,但日体授作时可根据说加书的姿求控制阻亡.室温阻口时，EUSA瓶只姿平置于操作台上M可.应注JIRiaSJ的逼度1时间应麒定力求准的.为保证这一点,一个人娓作时，一次不宜多于两块板同时观定.5洗涿洗滋在EUSA过程中虽不是一个反应步覆,但却也决定着实油的成败.E1.S1.A就是靠洗添来达到分离游离的和结合的S1.标记软的目的.通过洗涿以清嫁残用在短孔中没能与因怛抗原或抗依结合的物S.以及在反应过程中非聃异性地双IH于国相St体的干抗物质.聚丛乙烯等受料对蛋白质的吸附是苫与住的,而在洗海时又应把这种非特异性吸附的干扰物反洗渗下来.可以说在EUSA掰作中，洗涤是限主要的关位技术,JS引起姚作者的态度Ii视,1»作者应产格按要求洗添,不得马虎.洗秒的方式除某些EUSA仪修配有特殊的自动洗漆仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式IW*过程J下：(1)浸泡式a.啜干或用干孔内反应液：b.用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去)：C浸泡，即将洗涤液注滴板孔,放置1-2分神.问动,浸泡时间不可随.电缩短；d.R干孔内液体.吸干双彻底,可用水示或真空泉推英,也可用去液体后在:斯古毛巾或瞅纸上拍干；eIBt1.辨作c和d,洗课3-4次(或按说明规定.在间接法中如本届较高,可埔加洗添次皴或延长浸泡时间.微福定板妥采用浸泡式洗漆法.洗添液多为含非陶子田洗添剂的中性城冲液.JK莘乙推我依与威白标的结合i三R水性的，非离子型洗绦剂既含流水基团，也含亲水基团，H疏水基团与蜜白恭的舞水基团借舞水St结合，从而削弱蛋白质与固相战体的结合.弁借助于亲水基团和水分子的结合作用，使番白质回Si到水溶液状态,从而脱惠国相雄体.洗涤液中的非鹿子型洗添剂一皎是吐温20.其浓度可在O.0S%O.2%之间,高于0.2%的,可t包被在固相上的抗原或抗体解IK对而减低血的灵敝度.(2)流水冷洗式海水冲相去最初用于小林我体的洗涤，洗滋液仅为蔡国水甚至可用门来水.洗渗时的接一特殊装置.愦小珠在流水冷击下不断橱时淋洗.持城冲洗2分肿后,IR干液体,再用京IS水浸泡2分钟，吸干即可.浸利式犹如盆浴，海水冲洗式则好比淋浴,其洗濠效果更为彻底,ats®便、快速.已有文睑表明.通水冲洗式同样也适用于挖而定板的洗潦.洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面,洗;奈效果更佳.E1.ISA检测竞争法测抗体抗体的测定一般不使用竞争法.当抗原中杂质难以去除或抗原的结合特异性不稳定时,可采用这种慢式测定抗体.如乙型肝炎询博核心抗体(HB<Ab)和乙型鼾炎饯毒e抗体(HBeAb)的测定，由于e抗原较核心抗原仅多29个祝基般，e杭及很容易转变为核心抗原,因此，HBCAbHIHBeAb的测定均采用竞争法.但其测定具体模式有区别.抗原的国相化既可以百按迸行，亦可以通过相应特异抗体而问接下面的HBcAb和HBeAbEUSA测定具体探作步罪分述如下.1 .HBeAb的聊K(1)先将HBCAg在碳酸盐姬冷液中4-C过夜色18,形成固怛抗原,洗湿去除未与画蹴自竭合不坡的抗体后，用小牛血清或牛血清白母白等用闭.洗涤去除未结合的部分及杂质.(2)同时加入待测样本和族坛的特异抗体,混口一定时间石流板；此步中.特测样本的抗体将与陶标抗体克今与固怛上特异抗原结合.G)加入雨底物.；温音显色测定.显色的强施与特测样本中的相应抗体的含量成反比2 .HBeAb的克少法测定(1)先将HBeAb在峡酸砧谖冲液中4工过夜包拔,形成Ia相抗体,洗深去除未与IS相结合竭合不祟的抗原后,用小牛血清或牛血清白垂白等封闭,洗冰去Jtit未结合的部分及杂质，(2)同时加入待测样本和中和抗原HBeAg.温盲一定时间后洗板;就步中，待测样本的抗体将与固相抗体竞争三合与中秋抗原HBeAg,将测样本中HBeAb浓度越高,则与固相HBe-Ab结合的HBeAg越少,反之亦然；(3)加入89标的特异抗体,对育一定时间后流板；让步中，陶标抗体将与结合于因相抗侬上的特算抗原结合；(4)加入酹底物.海音显色洌定.显色的强施与特测样本中的相IS抗体的含量成反比HBeAb之所以要采用此种模式测定，主要是HBeAg的不秘理所JS.如在因相fi接包被HBeAg,财会因为HBeAg向HBcAg的易转变性,而导致就定溟差.抗体的竞争法测定不同于只有单个拉瞳；夬定簇的小分子抗际的竞争法庭定，具测定的可靠性.在很大程度上受竞争抗体的特片性和亲和力大小的影响,盍虫抗体与特测抗体在结合的特异性及亲1力越接近一致，刘测定的可靠性越强,但竞争用抗体均为相应抗原免疫动物所得,与机体魅架病毒后所产生的苏体肯定会有所为异,因而，在目前HBeAb和HBcAb的临床检测中，常有遑以解释的测定结果出说,这与其在方法学上的固有缺陷是分不开的.E1.ISA检测-一竞争法测抗原大分子抗原因其具有两个以上的抗原决定SJ.而可用双抗体夹心法利定，小分子半抗（R如电高辛.茶at等为族以及3,T4及学愉等勤素因K只有一个抗原决定技,从而无法使用双抗夹心方法测定,只腌采用竞争制法测定.日依步骤如下：1 .先用抗小分子的将异抗体如双抗体夹心法一样包机固相井封闭；2 .同时加入待测样本和菊标的小分子，温后一定时向后洗板；此步中，待测样本的小分子将与南标小分子克¥与SI相上特异抗体结合；3 .加入院底粉,温膏会色测定，显色的强弱与待测样本中的小分子含量成反比.这和测定模式中，需要得至叼'分子与酹的结合物,而小分子的结合物一则在制备上不如抗依的结合物简便，二则其纯化亦或为因短,结合有小分子的嶙与游赛院之间难于分离.因此，有人装试在合成二或各K体小分子的基地上,建立双杭夹心竞争E1.1.SA方法测定小分子，测定的灵越度桁特用性均有所««.E1.ISA检测-一间接法测抗体as本方法的!ft作如下：1 .将病原体的抗原在碳酸部场冲液中4-c过夜包拔,形成固相状原,洗涤去除未与国相结合或结合不聚的抗原后.用小牛U1.清或牛血清白Si白等封闭,洗添去JSft未结合的部分及杂质;2 .加入含待测杭体的临床样本如IS清等，源后一定时间后洗位,此时，待测抗体就会与固阳上特异抗原反应而吸附于国相上；3 .加入险标记的抗人IgG抗体，温育一定时间后洗板，此时,在固相上即形成圆相抗原一待测抗体T6标二抗R合物；4加入班底软.温育显色测定间接法测抗体在目前应用最色的是丙型肝炎病为抗体（抗HCV）.人免的缺照底序抗体（杭HrV）以及梅毒蟆提钵抗体等的SS定.从上邮3U三模式可见，间接法测抗体，严格地洪，所测定的仅为杭体的IgG类,不涉及IgM和IgA类,这是由西标二抗体所决定的.戮响间接法测定抗体的一个较大的IS票是包被抗廉的枕度.现在向按法观抗体中所使用的抗原一般均为三因工MIi组抗原，如HCV的NS3,NS4,NS5,H1.V的gp41和gp1.20和梅击峭5体TPN1.5,TpNI7,TpN47等.基因工卷抗原在纯化时应尽量去除用来表达的宿主如大肠杆B的抗原，以免由于机体存在对这种宿主抗原的抗体而引起0阳性反应.就外,由于机体的IgG类抗体浓度较高，其中也大部分为机体按既外界环境刺激所产生的非特异IgG,因此，为避免这些高浓度非杓异IgG对回相的吸时所致的锐阳性反应，通制需对待测样本做一定理度的雁释.临床E1.ISA测定常用模式-双抗体夹心法测抗原对于含多个抗原块定展的大分子生白，使用双抗体实心EUSA模式测定相当倚便,现有的商品试剂盒基本上都采用此种测定模式.具体观定方法如下：1 .首先以双抗依之一于破f1.rt冲液中41C下过夜包袱震萃乙烯等固相,形成IS相抗体，洗添去除未与固相t三合或结合不象的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未i三合的部分及杂S.2 .加入含侍测粉的临床样本如血清等,温音一定时间后洗板;ttW,待测抗息就会与回相上特异抗体反应而取附于固相上：3 .加入陶标记的双抗体之二，混口一定时间后洗收；此时,在司相上即膨成双抗依与特异抗原的夹心产物；4 .加入随底?SJ.海音显色测定.在该测定!式中，有两步ifiSJft1.板孔洗涤步骤,如果将上述测定步骤2和3并为一步，即将特测样本和IS标抗体同时加入，从而仅有一步温音和洗板过程,即为通常所说的一步法.K初的双抗夹心EUsA试剂盒，均采用两步.后来，人Ii)为了节酶间，简化操作步骤，如生产E逐步推出了“一步法.试剂盒.目前在我们的临床实骗案中，测定大分子抗麻如HBsAg.FP和hCG等.JI本上都采用一步法.一步法相比于两步法，虽然操作筒中但有其固有的现陷,处理不好，对EUSA9J½t三JR有产8!影哨.在通常的两步温音洗涤方法中,抗原抗体反应将理网下述规律，即在第一步中加入的待测标本中抗原(Ag)农度逐步增加用.将快回栩I体(Ab)与抗忌的结合逐步达到饱和W1.式)，这样当随,后加入一定浓度的酹根抗体(Ab)后,a复合物的形成将亘接与在第一步中形成的bSi合转相关1(2)式).因就.牯观抗原法度的逐步增加导致了显色的逐步加深,当抗原浓度588到一定程度时,反成显色达到平台,而SS形变化曲线而一步法双抗夹心E1.ISA的反应曲婉则为冲形曲线.也就是说测定显色fiS待则标本中抗余浓度的增配而升高至一定程度后,测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降百至不显色,即所iW的钩状效应-(bookeHect),也3t是我们在免疫沉淀试验中所称的一希设象Xzonephg.menon).一步法的反应早衡式如(3)式tt5t.b和c或合物的电a亦使得双抗体夹心双合物济以形成但如果固相单抗和标记单抗果用针对抗原的不同目交间距通校远的决定簇的抗体,即包检使用一稗单抗.酹标记使用另一种单抗.同时充分混匀反应液，并适当延长反应温适时同，则可使b,.和C或合物减少至最低程度,而大大Si建梏状效应.我mIS使用本空能得到的含最高浓度(均2mgIm1)HBAg的血清样本对目前囱内校大的试剂生产家的一步法HB3g测定E1.ISA限制盒的构状效应j8行了评价,尽H大部分有在HBsAg最高浓度下的测定显色坡次高浓度(1：k林棒)显色要;£的现余,但均未出现该份样本测定为阴性的情况.尽管如此,在临床实际工作中，仍有可能遇到食状效应较严密的HBSAa测定EUSA试剂盒，我们½经常听到基层实验空同行在这方面的反拐.因此,大家汪应该IS视这方面的问题，当发现测定结果明£与临床不符或与相关测定指根互有矛IB.如HBeA9阳性洋本HBsAg测定为用性时，就应考启HBsAg测定可能存在的钩状效应向88.综上所,一步法EUSA试剂盒作为变合1咨床实骗云简便快速要求的产物，有将巨大的市场，尺虽有潜在玦愁，易与致含高浓度将浏物的标本磔为历性(修泪性)，但褶心的卖给设计,对包蜘版记抗体仔班选择，完全可以将构状效应-出现的可能性降至最低.此外，建议生产HBsAg,aFP和hCGE1.ISA一步法测定试加盒的厂家,应对所产的试剂在出厂前对具钩状效应Xhooke他Ct)进行充分的研究，井阳械用户在使用时应注意之处.双抗体来心法测抗B1.另一个所需要注意的是关风海因子(RF1.的干扰.我们知道，RF是一种抗变性IgG的自身抗体,主要为19S的IgM类杭体，也可见7S的IgG及炳类抗体.这种自身抗体的特住是其是施与多神动担的变性IgG的Fc88分t三合.因此,如果血清标本中含有RF.在双抗夹心E1.ISA检测时,其即可作为国相抗体和萌标抗体(均为均之间的新接抗原.而产生假阳性反应.因此，效果使用抗体的FabZ:或Fab片段作为缺标记用抗体，则可避免RF的干扰.E1.ISA测定双抗原夹心法测抗体接法谢体实际上3U定的只有IgG关.而双抗感决心防测定的抗体财为所有各类，且不受非特异gG的干机,因此，双杭原突心法测抗体的灵低度和特异性要高于间接法.目前,为推离抗体测定的灵教.国内的间接法E1.1.SA试剂盒正逐步地向双抗原央心法转变.双抗原夹心法测抗体的模式类归于双抗体夹心法测抗原,其授作步次亦基本相同,也可采用一步法-,只不过由于机体产生抗体G的液度百眼，因而不会有'钩状效期出现,但为了保证测定的灵敏卿H4异性.BS标用抗忌值仔蒯以选提.