SARS病毒单克隆抗体的制备.docx

细胞工程初履上浮SARS病毒单抗体的制备程心诚目的探讨制备和鉴定SARS冠状病毒N蛋白单克降抗体快速免疫方法,为人类健康保驾护航！钿跄工程之S，曲阜就体的携树制备信息关催字：SARS冠状病参单克隆抗体杂交痛细胞篇选方法方法：用基因虹组SARS冠状病毒N蛋FI和免投2周的BA1.B/c小IU制备，并果纳ElJSA间接法、免授英光和免投印迹进行筛选和鉴定.结果筛选出1株抗SAKS冠状病毒X蛋向维抗体杂交卷细胞株,EIJSA间接法和免疫荧光证明这担单克隆抗体仪与SARS冠状病毒特异性反应,而与其他病原体无交叉反应JgG亚类鉴定2株为IgGl,另2株分别IgG2a和IgG2b2株抗体亲和常数分别为1.M×10-9Y和3.19×10-9M.结论获得特好性针对SARS冠状病设的单克陵抗体,为SRRS的早期诊断、蛋白组学和发稻机制的探讨要定了基础.制备流程图： 抗原接种皮下接种接种对象：目曲应用最广的是小白鼠和大白鼠.尤以小白取为好.就品系而言以Balb/C小白鼠的用最广，因为全部的小白鼠骨骼椅系均从Balb/c小白鼠系诙导出来.Balb/c系小白鼠必需用纯系的，解博均可.以812周龄为宜.一般而言.抗原的纯度不很重要.只要足够引起免疫反应即可特殊是免疫原性较强的抗原。 效应B淋巴细胞制备注，以免疫三天后取样，此时分别的B淋巴蜴胞量适于后候的Ik合.(1)免疫过的血清抗体滴度而的Balb/cf丸拉颈或用C02处死小白鼠。(2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无陋条件下取牌.(3)把髀放入5ml含有2.5%FCS的1640液中，冰浴下轻轻洗去髀上的红血球，反复离心分别镜检略过 病细胞复苏注：痛细电必得来自于和B蒯鹿同品系的Balb/cR,消退细胸或合时起免疫反应.该脑细胞系的来源应与制备脾细咆小泉为同品系，以便两者的组织相容性抗原一样：骨树斓细胞必需是舲思状态，不产生Y球蛋白或不分泌到细恂外；骨的箱细胞生长须要一个较高的细胞密度,最好106个细胞/ml：生长速度快，繁疥时间短.骨蚀痛细胞一般由有关单位干脆引入，保存于-195C液氯SS中，试验时亚苏、增珀、传代即可. 细胞融合与筛选(1)、取末次免疫后的第3天小鼠啤细胞总液,将108小鼠脾细烟与1.5X107SO2/O小以令微质细胞混合于50厘升刻度离心管中,经100O传/分别心7分伸：(2)、弃上消液,尽可能除得干净,用手指轻叩离心管底部，使沉淀混匀如糊状，.心管置37C水中进行水浴(小烧杯中),打算融合：3)、将37V水浴中保温的50%PEGlQ至升(实际应用0.71开)用滴管线慢滴入离心管中，在60秒钟内滴完，在37C水浴中边滴边摇边离心管，使细胞保存在混匀状态：4)、加完PEG后,将细胞恐液放在37C水浴中前置90秒钟,马上在24分钟内加入15充升无血清的RPMlr640培育肥(37V),起先要一滴一滴施加，由于稀择使PEG停止作用。用意尽可能不搅动细胞：5)、再羟100转/分别心10分钟.弃去上清液，加25厘升HAT培育液,轻轻混勾，将混悬液分装已行Ii噬细胞的两个24孔培fj板中，衽孔05富升；6)、物培育板放在水蒸汽饱和82孵箱中,37C孵育.82含贵为5%：7),年23天换一次HAT培育液.连续2周视察杂交痛细胞是否出现.2周后运用HT培育¾k杂交痛细胞培育与生产.对于选育出来的杂交楣细胞,还要对其进行驯化、试舱室小试、中试后才能进入化工厂生产.二、工艺路途的优化.三、培育条件的限制与优化.四、发解设备的设计改造等等单克隆抗体的分别制备、纯化及检测经过人工手段，单克隆抗体是一种高效分泌胞外蛋白，其分别制招方法与其他活性蛋白方法具有一般相像性已完成的或正在研制多种抗SARS病揖段甫中，SARS灭活和减毒病毒疫苗的探讨已取得肯定成果，但由于该类疫苗本身的一些生物学特性，应用受到了限制，因此新型法因工程疫苗仍是探讨的重点.参考文献：1鲍海逊,总梅,程风琴,谢维,张建琼.SARS冠状利毒S狙白基因片段的表达及其单克隆抗体的制HJ东两高校学报(医学版)，2009,19页(2)戚扬；郝俊勤；迟瞅弹；孙艳玲；赵械民；程云；用抗SARS冠状病毒N来白单克瞳抗体定位探讨受染器官，传染病信息，2009年01期-32页杨保安，抗SARS冠状病毒中和活性单克隆抗体的饼选及其结合位点分析，中华微生物学和免疫学杂志,2006.-15页.