MAL基因在原发食管癌组织表达及临床意义_0.docx

MA1.基因在原发食管癌组织表达及临床意义MA1.基因在原发食管癌组织表达及临床意义作者：陈皓作者单位：泰安市中心医院肿瘤外科，山东泰安271000【摘要】目的探讨MA1.基因发达下调与食管癌病理分期、组织学分级的相关性。方法采纳RT-PCR和半定法RT-PCR方法检测45例食管癌组织和癌旁食管黏膜组织中MA1.基因的表达。结果40例食管癌组织中M1.mRNA表达明显低于相应的癌旁食管黏膜组织(2=30.59,P0.01);IH期病人的MA1.基因表达水平显著高于III期病人(t=5.952,P0.001),淋巴结转移阳性病人MA1.nlRNA表达水平显著低于淋巴结转移阴性病人(t=6.743,PO.001):结论MA1.mRNA在食管癌组织中的表达与临床分期、组织学分级等临床病理因素有肯定相关性，可作为推断食管癌恶性程度、转移潜能及预后的试验室指标。【关健词】食管肿瘤;MA1.基因；逆转录聚合福链反应THEEXPRESSIONANDC1.INICA1.SIGNIFICANCEOFMA1.GENEINPRIMARYESOPHAGUSCANCERClIENHAO(DepartmentofOncology,TaianCentralHospital,Taian271000,China)ABSTRACTObjectiveToexploretherelevancebetweenVA1.geneexpression,clinicalstageandhistologicgradeofesophaguscancer.MethodsTheMA1.geneexpressionin45cancerpatientswasdetectedwithRT-PCRandsemi-qua11titaliveRT-PCRtechnique.ResultsThemRNAexpressionofM1.in40cancertissuesampleswaslowerthanthatinthesurroundingesophagusmucousmembrane(2=30.59,PO.01).ThegeneexpressioninstagesIandIlpatientswashigherthanthatinstage111patients(t=5.952,PO.001).Thosewith1ymphnodemetastasisshowedlowergeneexpressionthanpatientswithout(t=6.743,PO.001).ConclusionInesophaguscancer,theM1.geneexpressionwasassociatedwithhistologicgradeandclinicaistage,whichcanbeusedfordeterminingtumormalignancyandpredictingitsprognosis.KEYWORDSEsophagealneoplasms;MA1.genc;ReversetranscriptasepolymerasechainreactionM1.基因是由A1.ONSO等1于1987年分别得到的抑制肿瘤生长的新基因，MA1.基因失活及异样与细胞信号转导、肿瘤的发生发展和临床预后等有肯定关系。近年来，MA1.基因与食管癌的关系已成为探讨的热点。本探讨利用定性和半定量逆转录聚合函链反应(RT-PCR)方法检测食管癌组织及其癌旁组织中MA1.基因的表达状况，旨在探讨MA1.基因在食管癌发生发展过程中的作用，及其与临床病理因素的关系，为食管癌发病机制的探讨供应新思路。1材料与方法1.1标原来源1.1.1病例选择2004年6月2006年3月，泰安市中心医院住院的食管癌病人45例，男25例，女20例；年龄36-79岁，平均57.5岁。术前均未发觉远处转移，未行放、化疗治疗。手术方式均为经左胸行食管癌次全切除胃-食管弓上或弓下吻合术，术中无肉眼可见肿瘤残留。术后病理检爸均证明为鳞癌。按UICC食管癌分期标准(1997)进行分期。1.1.2标本取材和保存食管癌组织及癌旁组织取自食管癌病人手术标本，组织离体后马上无菌取材，从肿瘤生长活跃无坏死的部位取下约1cm3癌组织及5cm外癌旁组织，标本30min内送试验室，簇新提取总RNA;不能保证30min内制备样品的，在取材后放-80C冰箱保存备测。1.2 检测方法采纳半定量RT-PCR法检测MA1.mRNA的相对表达水平。总RNA提取：采纳Trizol提取总RNA,并进行纯度和浓度测定。RT反应：于DEPC处理的Eppendorf管中，加入Ig总RNA、MM1.V及随机引物等，快速离心混匀后，37"CIh,95,C10min灭活MM1.V,快速离心使蒸气沉于管底。PCR反应：于0.5m1.Eppendorf管中加入RT反应产物、PCR反应体系、MA1.上游引物(5-AAGATeCTCTGCTGACCeCT-3)、MA1.下游引物(5-CCTGGCCTCTGGAG-3)、-actin上游引物(5-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3),以及-actin下游引物(5-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3),扩增片段长度为500bp;95*C5min,离心使蒸气沉于管底，加TaqDNA聚合临，快速离心混匀。循环条件：94C1min,58Clmin,72"C1min,循环35次，末次延长7min。电泳鉴定，视察目的基因，试验中仅出现一条500bp-actin条带为M1.InRNA阴性；同时出现166bp条带为M1.mRNA阳性。采纳数字图像分析仪2200系统视察拍照并进行半定量分析，以M1.-actin比值作为M1.mRNA相对表达量，若比值小于25%为表达缺失，若比值小于50%则为低表达，低表达与表达缺失均为异样表达。1.3 统计学分析应用SPSS10.0统计软件，对定性RT-PCR结果进行2检验及准确概率法;对半定量RT-PCR结果进行t检验。2结果2.1食管癌组织和癌旁组织中M1.mRNA的定性检查结果比较45例食管癌组织中未见MA1.表达者28例，弱表达者12例;癌旁组织食管黏膜组织MA1.mRNA全部呈阳性表达。食管癌组织中MA1.mRNA表达明显低于相应的癌旁食管黏膜组织,差异有显著性(2=30.59.PO.ODo见图1。图1RT-PCR检测食管癌组织MA1.mRNA的表达、为食管癌组织MA1.mRNA表达阳性;、为食管癌组织MA1.mRNA表达阴性；为X174Haeln分子质量标记物2.2MA1.mRNA的半定量RT-PCR检测2.2.1食管癌组织和癌旁组织中MA1.mRNA表达水平比较本文45例食管癌组织MA1.mRNA相对表达水平为0900.11,而癌旁组织中M1.mRN的表达水平为1.510.27,两者比较差异有统计学意义(t=2.329,P0.05),2.2.2食管癌组织MA1.mRNA表达水平与临床病理分期的关系MA1.mRNA表达水平与食管癌病人性别、年龄无关，但随临床分期的增高，其表达水平明显降低(P0001),且淋巴结转移阳性者MA1.mRNA表达水平显著低于淋巴结转移阴性者(P0.001)。见表1»表1食管癌组织MA1.mRMA表达水平与临床病理特征的关系3讨论M1.基因定位于2ql3,共含有4个外显子,其cDN长为051bp。M1.是T淋巴细胞成熟相关蛋白，它剧烈表达于正常食管上皮细胞，1987年A1.ONSO等口报道具有特征性的MA1.CDNA克隆呈现在成熟T淋巴细胞上。现已证明，MAI.是组成向顶端运输的细胞膜和分泌性蛋白的必不行少的组成部分26.基于M1.的功能是诱发广泛的大量囊泡形成，有作者提出，MA1.在顶端传送体的形成中扮演着重要角色7,8现在已有很多探讨证明，MAI.表达和人类食管恶性肿瘤相关。有学者报道，MA1.基因在食管癌发生的不同阶段均表达下调，且从不同角度分析和探讨MAI.基因表达下调的可能机制，MA1.的不表达或表达下调在食管癌发生中可能起确定性作用9,10oTUG0RES等11报道，MA1.启动子区设计缺失影响转录子失活，没有视察到MA1.基因组区有遗传性的修改，而且在13例食管癌细胞株中有3例M1.启动子发生甲基化，9例细胞株中MA1.表达正调整。其机制可能为VA1.启动子DNA甲基化和组蛋白脱乙酰基协同作用于MA1.基因导致肿痢发生。然而，现在仍没有明确MAI.基因在癌组织中表达是否被其他机制调整，如染色体缺失、突变或其他畸变。功能性测定表明，在癌细胞中外源性MA1.的表达可引起细胞运动性降低，在活体内致瘤性下降。本探讨采纳定性和半定量两种方法探讨了食管癌VA1.mRNA的表达与性别、年龄、临床分期及组织学分级等因素的关系。结果显示，MA1.mRNA的表达缺失在不同性别、年龄中无明显差异，从而推想食管癌MA1.mRNA的表达缺失与性别、年龄无关，而MA1.基因的表达与食管癌的组织学分级、临床分期也无相关性，与文献12,13报道不符，可能与病例数较少有关。本文探讨结果显示，食管癌组织VA1.mRN相对表达量与癌旁组织比较差异有显著性，且随临床分期和组织学分级的增高，其表达水平明显降低，即MA1.基因在食管癌组织中表达显著下调。表明MA1.基因表达下调是食管癌发生、发展过程中的一个频发事务。国内许智雄等14通过PCR分析显示，在食管癌细胞系EClO9、EC8712和EC9706中都存在被分析的MA1.基因片段。本文在探讨食管癌组织MA1.基因的表达同时，也探讨了MA1.基因与食管癌淋巴结转移的关系。结果显示，淋巴结转移阳性组MA1.的表达显著低于淋巴结转移阴性组(P0.05),提示食管癌组织MA1.的低表达与淋巴结转移存在显著的相关性，关于MA1.基因如何调整食管癌淋巴转移的机制仍不非常清晰。淋巴结转移是食管癌的独立危急因素，MA1.的低表达与淋巴结转移存在显著的相关性，因此，MA1.基因的表达与食管癌的预后有肯定的相关性。目前，关于食管癌MA1.基因与淋巴结转移的关系的同类探讨尚未见报道，要得到更加精确和客观的结果还须要更大样本量的探讨。【参考文献】1A1.ONSOVA,WEISSMANSM.cDNAcloningandsequenceofM1.,ahydrophobicproteinassociatedwithhumanT-celldifferentialionJ.ProcNatlAcadSciUSA,1987,84:1997-2001.2CHEONGKH,ZCCHETTID,SCHNEEBERGEREE,etal.VIP17MA1.jaIiPidraft-associatedprotein,isinvolvedinapicaltransportinMDCKcellsj1.ProcNatlAcadSciUSA,1999,96(11):6241-6248.3PUERTO1.1.NOR,A1.ONSOMa.MA1.,anintegralelementoftheapicalsortingmachinery,isanitinerantproteinthatcyclesbetweenthetransGolginetworkandtheplasmamembraneJ.MolBiolCell,1999,10:3435-3447.4A1.0NS0M1BARTOND,FRANCKEU.MA1.,amembraneproteinassociatedwithhumanTcel1differentiation,isencodedonhumanchromosome2,regioncenql3j.CytogenetCellGenet,1987,46:570-575.5MARTlN-BE1.MONTEF,PUERTO1.1.ANOR,MI1.1.ANJ,etal.ExpressionoftheMA1.geneinthethyroid:theMA1.proteolipid,acomponentofglycolipid-cnrichedmembranes,isapicallydistributedinthyroidfolliclesJ.Endocrinology,1998,134:2077-2084.6VARTlN-BE【NONTEF,RVNP,1.ONSOM.MA1.mediatesapicaltransportofsecretoryproteinsinpola-rizedepithelialMadin-DarbycaninekidneycellsJ.JBiolChem,2001,276:49337-49342.7PUERTO1.1.AN0R,1.IS,1.ISANTIMP,etal.TheMA1.proteolipidisnecessaryfornorma1apicaltransportandaccuratesortingoftheinfluenzavirushemagglutinininMadin-DarbycaninekidneycellsJ.JCellBiol,1999,272:18311-18315.8PUERT01.1.N0R,Martinez-Menarguezja,batistaa,etai.a11intactdilysine-likemotifinthecarboxylterminusofMA1.isrequiredfornormalapicaltransportoftheinfluenzavirushemagglutinincargoproteininepithelialMadin-DarbycaninekidneycellsJ.MolBiolCell,2001,12(6):1869-1883.9MIMORIK,SHIRISH1T,MASHINOK,etal.MA1.geneexpressioninesophagealcancersuppressesmotility,invasionandtumorigenicityandenhancesapoptosisthroughtheFaspathwayJ.Oncogene,2003,22:3463-3471.10KAZEMI-N0UREINIS,CO1.ONNA-RoMNOS,ZIAEEA,etal.Differentialgeneexpressionbetweensquamouscel1carcinomaofesophageusanditsnormalepithelium;alteredpatternofmal,akrlc2,andrabllaexpressionJ.WorldJGastroentero,2004,10(12):101716-101721.11TUGORES,RUBIOT,RANCANOC,etal.MA1.regulatesCIaIhrin-mediatedendocytosisattheapicalsurfaceofMadin-Darbycaninekidneycellsj.DNACellBiol,1997,16:245-255.12郭长青,王明荣，李继吕，等.食管癌Mal基因5调控区的克隆及序列分析J.中华消化杂志，2001,21:271-275.13王子平，王明荣，许智雄，等.食管癌MA1.基因改变的RNA原位杂交探讨J.中华医学遗传学杂志，2000,17:329-331.14许智雄，王明荣，蔡岩，等.人食管癌表达下调基因的分别和表达分析C/孙力傣.中国科协其次届青年学术会论文集.北京：中国科学技术出版社，1998:226-228.测论文查重检测免责声明1.用户明确同意其运用网络服务所存在的风险将完全由其本人担当：因其运用网络服务而产生的一切后果也由其本人担当。对用户及任何第三方不担当任何责任。2 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