GB_T 43714-2024 饲料中泰拉霉素的测定 液相色谱-串联质谱法.docx

ICS65.120CCSB46中华人民共和家标准GB/T437142024饲料中泰拉霉素的测定液相色谱-串联质谱法Determinationoftulathromycininfeeds一1.iquidchromatography-tandemmassspectrometry2024-03-15发布2024-10-01实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承扭识别专利的责任。本文件由余国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本文件起草单位：浙江正明检测有限公司、宁波市农产品质量检测中心。本文件主要起草人：吴银良、付岩、徐峰、朱勇、马艳、应永飞、王全胜、吴市学、黄玲、史西志。饲料中泰拉霉素的测定液相色谱一串联质谱法1范围本文件描述了饲料中泰拉霉素的液相色谱联侦谐测定方法。本文件适用于配合饲料、浓缩铜啊、精料补充料和添加剂预混合饲料中泰拉霉素的测定。本文件的检出限为10.0gkg,定最限为20.0gkgo2规范性引用文件下列文件中的内省通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。具中，日期的引用文件，仅该日期又应的表本道用卜片丈作,4sI：IIJIir-/-2括所有）但胸单）适用于本文件GB/T6682分析实验用水规格和育方流GB/T2019动物饲料零武能的制备3术语和定义本文件没有需要界定的和4原理试样中的泰我霉素（泰拉霉素A和泰拉霉素B）用甲酸甲醇溶液提取，经固相萃顺柱净化后，用液相色谱-串联质谱仪测定，泰拉霉素A和泰拉霍素B响应一致。以泰拉霉素人为标难品，基质匹配标准溶液校准，外标法定量。5试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5.1 水：GB/T6682,一级。5.2 甲酸：色谱纯5.3 甲醇：色谱纯。5.4 乙睛：色谱纯。5.5 甲酸甲鸣溶液（0.25%,体积分数）：移取2.5m1.甲酸（5.2）,用甲醇3）稀释至100Om1.,混匀。5.6 甲酸溶液（0.1%,体积分数）：移取Im1.甲酸（5.2）,用水稀释至100om1.,混匀，5.7 甲醇-甲酸溶液：移取90m1.0.1%甲酸溶液6）和Iom1.甲醇（5.3）,混匀。5.8 标准储备溶液（ImgZm1.）:称取泰拉霉素A（CAS:217500-96-4,纯度不低于97.0%）10mg（精确至0.01mg）于10m1.容量瓶中，用甲醇3）溶解并定容，混匀。-18°C以下保存，有效期6个月。5.9 标准中间溶液（IOHgm1.）:准确移取Im1.标准储备溶液8）于100m1.容量瓶中，用甲醇（5.3）稀释定容，混匀。T8°C以下保存，有效期2个月。5.10 标准系列溶液：准确移取适量标准中间溶液(5.9)于容量瓶中，分别用甲醇-甲酸溶液(5.7)稀释定容，混匀，配制成质量浓度分别为0.5ngm1.、Ing/m1.、2.5ngm1.>IOng/m1.>25ngm1.和50ng/m1.的标准系列溶液。临用现配。5.11 增强型脂肪去除固相萃取柱：300mg3m1.,或相当者。5.12 微孔滤膜：0.22U皿有机系。6仪器设备1.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。1.2 分析天平：精度为0.01mg»0.Olgo6. 3离心机：转速不低于9000rmino7. 4振荡器：转速不低于300Iymin。8. 5涡旋混合仪。8.1 固相萃取装置。8.2 氮吹仪。7样品按GB/T20195制备样品，至少20Og,粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛，充分混匀，装入磨口瓶中，备用。选取类型相同、均匀一致，且在待测物保留时间处，仪器响应值小于方法定量限30%的饲料样品，作为空白样品。8试验步骤8.1 提取平行做2份试验。称取试样2.5g(精确至0.0Ig)于50m1.,离心管中，准确加入20m1.甲酸甲醉溶液(5.5),300rmin振荡提取15min,9000r/min离心3min,移取上清液于另离心管中。重复提取1次，合并上清液，混匀，备用。8.2 号准确移取2m1.备用液(8.1)过周相萃取柱(5.11),用1m1.甲醇(5.3)洗脱，收集过柱液和洗脱液于50氮气吹干，准确加入2m1.甲醇-甲酸溶液(5.7)溶解残渣，涡旋混匀，微孔滤膜(5.12)过滤，待测。8.3 基质匹配标准系列溶液的制备称取空白试样，按照8.1和8.2操作至“50°C氮气吹干”后,分别准确移取2ml.标准系列溶液(5.10)溶解残渣，配制成质最浓度分别为0.5ng/m1.、Ing/m1.、2.5ng/m1.10ng/m1.、25ngml.和50ngml.的基质匹配标准系列溶液。临用现配。&4被8.4.1 液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下:a)色谱柱：CS柱，柱长50mm,内径2.1mm,粒度1.7um,或性能相当者;b)柱温：35;c)进样量：5Ul;d)流速：0.3mlmin;e)流动相：A相为甲酸溶液(5.6),B相为甲醇(5.3),梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序时间minA相%B相%0.090100.590103.010903.510903.690106.090108.4.2 质谱介考条件质谱参考条件如下：a)电离方式：电喷雾电离，正离子模式(ESI+);b)检测方式：多反应监测(MRM);c)毛细管电压：3.OkV;d)离子源温度：150C;e)脱溶剂温度：500;)脱溶剂气：氮气100O1.Zho多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压及碰撞能量见表2。«2待刑物的多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压及碰撞能参考值待测物名称监测离子对m/x锥孔电压V碰撞能量eV泰拉德素A806.8>158.2238806.8>577.6°222“为定量离子对。8.4.3 基质匹配标准系列溶液和试样溶液渊定在仪器的最佳条件下，分别取基质匹配标准系列溶液(8.3)和试样溶液(8.2)上机测定。基质匹配标准溶液的定量离子对色谱图见附录Ao8.4.4 定性在相同试验条件下，试样溶液与基质匹配标准系列溶液中泰拉霉素A的保留时间一致，其相对偏差在±2.5%之内。根据表2选择的定性离子对，比较试样谱图中泰拉霉素A定性离子对的相对离子丰度与质量浓度接近的基质匹配标准溶液中对应的定性离子对的相对离子丰度，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在泰拉霉素。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差%相对离子丰度502050>10-2(10最大允许偏差±25±±508.4.5 定量以基质度配标准溶液中泰拉霉素A质量浓度为横坐标，定量离子对色谱略面积为纵坐标，绘制标准曲线，其厢关素数应呆低于099、武环溶液业东按保态导见质匹配标准准液中卷拉看素A的响应值为应在仪熟检期勺线性范四的,如超田级范确«o单表按作是量时,最样清液中泰拉霉素质量浓度与基质匹配标准资液项正液度相差的路过”9试验数据处理试程中泰立霉素的含部取质最分如值以微究每工克中表委。多康校准按公式计算；单点概准接公式计篮式中：p电基质临配标准曲线得到的试样溶液中泰拉霉素A的所重浓用，单位为纳克每毫升(ngm1.);V1提取启提取液总体积，单位为亳升(m1.);V3一一试样的最终定容体积，单位为电师V.净化用试样提取液体概单位为毫升(m1.m试样质量，单位为克(g)；1000换算系数。AXVaX)OoOW=.VV.<m-10002式中：A试样溶液中泰拉霉素的峰面积；A,一一基质匹配标准溶液中泰拉霉素A的峰面积：p.二二基质匹配标准溶液中泰拉霉素A的质量浓度，单位为纳克每毫升(ngm1.);V 1一一提取后提取液总体积，单位为亳升(m1.);V 3试样的最终定容体积，单位为毫升(m1.)；V 2净化用试样提取液体积，单位为亳升(m1.);试样质量，单位为克(g)；1000换算系数。测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。10精密度在重复性条件下，2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的15%。附录A(资料性)基质匹配标准溶液定离子色谱图基质匹配标准溶液定量离子色谱图见图AJo100-I1.002.003.004.005.t/min标引序号说明：1泰拉霉素Ao图A.1基质匹配标准溶液(1.0nm1.)定离子色谱图中华人民共和国国家标准饲料中泰拉骞索的渊定液相色谱-串联质谱法GB/T437142024中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100O29)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室：(OlO)68533533发行中心：(010)51780238读者服务部：(OIO)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销开本880X12301/16印张0.75字数12千字2024年3月第版2024年3月第次印刷书号：1550661-75425定价29.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话1(010)68510107